初步研究冬蟲(chóng)夏草二級(jí)接種步驟

    論文關(guān)鍵詞:冬蟲(chóng)夏草;二級(jí)接種;人工培養(yǎng);接種瓶
    論文摘要:冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis sacc)具有很大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,但目前天然冬蟲(chóng)夏草逐漸減少。現(xiàn)在人們開(kāi)始了人工培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草。在實(shí)驗(yàn)中冬蟲(chóng)夏草二級(jí)接種是人工培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草的關(guān)鍵。冬蟲(chóng)夏草二級(jí)接種是指由一級(jí)種接到接種瓶?jī)?nèi)。二級(jí)種更有利于冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體的長(zhǎng)出。接種前需要配制培養(yǎng)基和滅菌。接種時(shí)動(dòng)作要快且準(zhǔn)降低污染率。接種后,放在黑暗室溫下培養(yǎng),觀察結(jié)果,分析原因,探索更好的方法,從而更利于冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體的長(zhǎng)出。 
    冬蟲(chóng)夏草,冬天是蟲(chóng),夏天是草,冬蟲(chóng)夏草簡(jiǎn)稱(chēng)蟲(chóng)草,是冬季真菌寄生于蟲(chóng)草蛾幼蟲(chóng)體內(nèi),到了夏季發(fā)育而成。冬蟲(chóng)夏草主要分布在青海,西藏,四川,云南,貴州,甘肅海拔4000米左右的高海拔地區(qū),而且含量非常少。冬蟲(chóng)夏草蟲(chóng)體呈金黃色,淡黃色或黃棕色,藥用價(jià)值高功效好。在國(guó)內(nèi)外被視為珍品,市場(chǎng)需求量大,但因其天然資源量稀少,故價(jià)格十分貴。 
    冬蟲(chóng)夏草可以降低血液中的膽固醇和甘油三酯,提高對(duì)人體有利的高密度脂蛋白,減輕動(dòng)脈粥樣硬化。 
    除次之外,冬蟲(chóng)夏草還具有直接抗病毒、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)性功能等作用。冬蟲(chóng)夏草能對(duì)人體起到如此全面的保健作用,可謂神奇之極,也無(wú)愧自古以來(lái)“仙草”的美稱(chēng)。在現(xiàn)代社會(huì),服用冬蟲(chóng)夏草已不僅僅是本身身體健康的保證,更重要的是由此帶來(lái)的極致健康生活品質(zhì)。 
    1 材料和方法 
    1.1 材料 
    在做二級(jí)接種實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的材料:冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis sacc)一級(jí)種是由2005年5月從西藏采來(lái)的冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體經(jīng)無(wú)菌分離培養(yǎng)所得。根據(jù)多次試驗(yàn)培養(yǎng)基成分結(jié)論如下:葡萄糖10g、磷酸氫二鉀1g、蛋白胨7g、維生素B2兩片、七水硫酸鎂0.3g、水1000ml、650ml大米。 
    1.2 方法 
    藥品的稱(chēng)量:對(duì)于一克以下的用精確的天平稱(chēng)量。在稱(chēng)量過(guò)程中,先調(diào)節(jié)天平所在的平面平衡以及天平平衡,并在左盤(pán)中放張濾紙后也要平衡。然后,制定規(guī)格,用藥匙向左盤(pán)中放入所要稱(chēng)取得藥品直到平衡。但要注意先把天平放下來(lái),再取盤(pán)中的藥品。 
    大于等于一克的物品用托盤(pán)天平量取即可。首先調(diào)節(jié)托盤(pán)天平平衡,在這一過(guò)程中,要注意先把游碼調(diào)到零點(diǎn),調(diào)平后按左物右碼的規(guī)則。移動(dòng)游碼直到所需的規(guī)格,然后,用藥匙向左盤(pán)中放藥品直到平衡,則左盤(pán)中的藥品即為所稱(chēng)量的。 
    用量筒量取1000ml的水和650ml的大米。 
    在進(jìn)行二級(jí)種培養(yǎng)基制作過(guò)程中,我們運(yùn)用了一個(gè)方案 
    將量好的葡萄糖、磷酸氫二鉀、蛋白胨,維生素B2、七水硫酸鎂,同時(shí)溶解在1000ml水中,用玻璃棒攪拌使溶質(zhì)完全溶解。設(shè)總體積為v,稱(chēng)取0.65v大米約650ml的大米,并用自來(lái)水沖洗一遍。把沖洗干凈的大米和所配制的溶液放入蒸壓鍋內(nèi),蒸成熟米飯,然后冷直室溫,再平均裝到十個(gè)接種瓶(本試驗(yàn)用的是白色耐高溫高壓的罐頭瓶)內(nèi)。在裝的過(guò)程中必須使米飯疏松平齊,然后用細(xì)繩和單層塑料袋扎上瓶口。完成后再滅菌。 
    滅菌過(guò)程如下:把接種瓶放到滅菌筐中,在滅菌筐放進(jìn)高壓滅菌鍋前先檢查高壓滅菌鍋內(nèi)是否有足夠的水,檢查標(biāo)準(zhǔn)是看鍋底部中央有一個(gè)圓孔,當(dāng)水面高于或等于圓孔面時(shí)就可以。再打開(kāi)電源,然后按設(shè)置按鈕,通過(guò)上下鍵來(lái)調(diào)節(jié)溫度、時(shí)間,即125攝氏度、30分鐘。最后按液相按鈕。此時(shí)也可以設(shè)定一個(gè)保溫溫度。滅菌后切斷電源,通過(guò)紅外感應(yīng)打開(kāi)蓋[開(kāi)蓋時(shí)身體側(cè)向一旁,因?yàn)殚_(kāi)蓋會(huì)有大量熱氣冒出以免燙傷]小心地把接種瓶擺放在桌面上冷直二十四小時(shí)。 
    二級(jí)接種是指將試管[一級(jí)]內(nèi)的冬蟲(chóng)夏草菌絲接到空間相對(duì)較大的接種瓶?jī)?nèi),從而有利于冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體的長(zhǎng)出。
    接種步驟: 
    接種前,需將凈化工作臺(tái)提前打開(kāi)二十分鐘,一便工作臺(tái)內(nèi)的空氣是純凈的,同時(shí)也節(jié)省時(shí)間,提高工作效率。在凈化工作臺(tái)上做實(shí)驗(yàn)時(shí),需將凈化工作臺(tái)的每一個(gè)面都要有用酒精棉徹底擦干凈,臺(tái)上的任何物品也要徹底擦干凈。接種時(shí),手也要用酒精棉擦干凈,還要帶口罩。接種所用的任何儀器如接種鏟也要擦干凈。接種時(shí),把接種瓶打開(kāi)試管口不能碰到接種瓶口,而且不能在接種瓶口的上方,用接種鏟把試管內(nèi)的三分之一或四分之一的菌絲快速地放到接種瓶?jī)?nèi),并且要使菌絲與大米接觸(生長(zhǎng)菌絲的面與大米接觸]提高菌絲擴(kuò)展速度。接種時(shí)要快速低污染地工作,接種過(guò)程中接種鏟不要碰到任何面。接種完畢后,在凈化工作臺(tái)上把接種瓶封閉好,然后關(guān)掉凈化工作臺(tái),在寫(xiě)標(biāo)簽[內(nèi)容:實(shí)驗(yàn)名冬蟲(chóng)夏草二級(jí)種、作者、日期)。整理凈化工作臺(tái),打掃地面,刷洗試管,把洗凈的試管口向下放在斜面上涼干。把接種瓶放在黑暗室溫下培養(yǎng)。 培養(yǎng)兩個(gè)月時(shí),把接種瓶平均分成三組,編號(hào)為a、b、c。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上向a組加細(xì)沙子,向b組加大沙子,向c組不加任何東西。 
    a、b、c組的接種瓶放在黑暗室溫下培養(yǎng)。 
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 
    這種方法取得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 
    培養(yǎng)三天時(shí),接種瓶?jī)?nèi)有少量的白色菌絲長(zhǎng)出,但有些接種瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)青色被青霉菌污染,還有的變黑、紅等,出現(xiàn)這種現(xiàn)象說(shuō)明此接種瓶已經(jīng)被污染,需要及時(shí)清洗干凈,一防止其他接種瓶的污染。(清洗污染接種瓶,帶上口罩用小鏟把里面的大米全部挖出來(lái)放到垃圾袋內(nèi),把接種瓶放到水盆里加些洗調(diào)劑,用刷子刷,然后再?zèng)_洗一遍,倒立在桌面涼干。) 
    幾天后有大量白色菌絲長(zhǎng)出,同時(shí)也有的變紅色、黑色、青色等被青霉菌等所污染,同樣也要把污染的接種瓶清洗干凈,被污染的接種瓶清洗方法如上。 
    十五天,有大量白色菌絲往下延伸,逐漸長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。此時(shí)也有少量接種瓶被污染,也同樣的把污染的接種瓶清洗掉。 
    一個(gè)月,白色菌絲長(zhǎng)滿接種瓶,有時(shí)也會(huì)發(fā)現(xiàn)接種瓶?jī)?nèi)有水珠,則為菌絲呼吸作用的結(jié)果。菌絲也延伸到接種瓶的底部。菌落成各種形態(tài),高低不平,出現(xiàn)高峰和低谷。這時(shí)有污染的接種瓶則不用清洗掉,因?yàn)榇藭r(shí)接種瓶?jī)?nèi)的冬蟲(chóng)夏草菌絲占優(yōu)勢(shì)對(duì)其他菌的抵抗力增強(qiáng)。 
    兩個(gè)月,白色菌絲長(zhǎng)滿接種瓶,發(fā)現(xiàn)接種瓶?jī)?nèi)有水珠。 
    3 討論 
    由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,造成污染的主要原因是由主觀造成的。由于自身的操作能力不夠或者是在操作中忽視了會(huì)造成二級(jí)種污染的外來(lái)物質(zhì)。因此在以后要多動(dòng)手,提高操作能力。同時(shí)也要避免外來(lái)物質(zhì)的侵入。通過(guò)查找文獻(xiàn),我們了解到了溫度、濕度、光照、空氣對(duì)冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體長(zhǎng)出的影響。過(guò)高或過(guò)低的溫度造成冬蟲(chóng)夏草菌絲的死亡;培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不要太干燥否則不利于子實(shí)體的長(zhǎng)出;培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草時(shí)應(yīng)避光置于黑暗下培養(yǎng);在培養(yǎng)后期應(yīng)該向接種瓶?jī)?nèi)充氧氣,這樣有利于冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體的長(zhǎng)出。 
    人工培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草成功后,要擴(kuò)大培養(yǎng),供給人們的需求。同時(shí)降低了冬蟲(chóng)夏草的價(jià)格,使貧困的人也能買(mǎi)冬蟲(chóng)夏草。人工培養(yǎng)出冬蟲(chóng)夏草避免了冬蟲(chóng)夏草的滅絕,有利于資源的多樣性。人工培養(yǎng)出冬蟲(chóng)夏草會(huì)推動(dòng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,會(huì)生產(chǎn)出各種各樣的藥品和保健品,給社會(huì)帶來(lái)了財(cái)富,給人們帶來(lái)了健康。 
    參考文獻(xiàn) 
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一、日本煙草基本概況

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