馬克西米連的長子勃艮第公爵菲利普一世娶了卡斯蒂亞女王伊莎貝拉和阿拉貢國王斐迪南二世的獨生女胡安娜， 于是菲利普一世死后， 查理五世于1506年繼承了勃艮第公爵頭銜，獲取今比利時、荷蘭的領(lǐng)地。 1516年，他繼承了他外祖父斐迪南二世的阿拉貢國王，巴塞羅那伯爵、瓦倫西亞國王、那不勒斯國王、西西里國王頭銜。 同年，他又從其母胡安娜那里,繼承了卡斯蒂亞國王頭銜。 1519年，馬克西米連一世去世，查理五世被選為德意志國王，并繼承了其祖父的奧地利大公、斯蒂利亞公爵、卡林提亞公爵、 卡尼奧拉公爵、提羅爾伯爵頭銜。1520年，他加冕為神圣羅馬帝國皇帝。 查理五世在位期間，是哈布斯堡王朝最鼎盛的時期，但同時內(nèi)憂外患不斷。 他在位期間，從德國暴發(fā)的馬丁路德的新教革命席卷了整個歐洲， 并贏得了合法地位.。1521-1553年，查理五世和法王弗朗索瓦一世為了西班牙在意大利的領(lǐng)地進(jìn)行了五次大規(guī)模的戰(zhàn)爭，最終確保了西班牙在意大利的統(tǒng)治.。1526年奧斯曼帝國的蘇萊曼大帝征服了匈牙利，匈牙利王路易二世敗死，1529和1533年，蘇萊曼大帝兩次攻打維也納，查理五世的弟弟奧地利大公斐迪南一世不得不對奧斯曼帝國稱臣。 此后哈布斯堡王朝始終處于奧斯曼帝國的威脅之下，直到1571的勒班托海戰(zhàn)，查理五世的私生子約翰終于打敗土耳其人，解除了奧斯曼帝國的威脅。