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HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官的系統(tǒng)損害的相關(guān)性研究
HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官的系統(tǒng)損害的相關(guān)性研究HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官的系統(tǒng)損害的相關(guān)性研究
發(fā)布時間： 2003-10-25 作者：謝尚葵 馮樹芳 沈福民
摘 要 目的 分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)從基因到臨床表達的發(fā)病機制。方法 應(yīng)用PCR-SSOPH技術(shù)檢測113例確診SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。結(jié)果 漿膜炎與DQB1*0601正相關(guān)；神經(jīng)精神癥狀與DRB1*1501正相關(guān)；血肌酐增高與DQB1*0302、DQB1*0401正相關(guān)；血尿素氮增高與DQB1*0201負(fù)相關(guān)；蛋白尿與DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101負(fù)相關(guān)；血尿與DQB1*0301、DRB3*0301負(fù)相關(guān)；管型尿與DRB1*0302正相關(guān)；貧血和白細(xì)胞減少分別與DQB10201正相關(guān)；血小板減少與DRB1*1502和DRB1*1202正相關(guān)；淋巴細(xì)胞減少與DRB1*0302正相關(guān)；C3降低與DQB1*0303正相關(guān)，與DQB1*0301負(fù)相關(guān)；狼瘡細(xì)胞陽性與DRB1*1501負(fù)相關(guān)。結(jié)論 多個HLA-Ⅱ類等位基因和SLE的臨床表達有相關(guān)性，國人的SLE遺傳背景與其他人種有所不同。
關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡，系統(tǒng)性；HLA抗原；多態(tài)現(xiàn)象(遺傳學(xué))；易感性與特異性；等位基因
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)發(fā)病與多種HLA等位基因相關(guān)。為深入探討這些基因或其關(guān)聯(lián)的亞型與SLE臨床表達關(guān)系，我們引入PCR-SSOPH檢測技術(shù)，對113例確診的SLE病人進行HLA-DR、DQ位點等位基因分型，分析基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，找出重型SLE相關(guān)基因。
1 資料與方法
1.1 病例選擇：入選的113例患者均符合1982年美國風(fēng)濕病協(xié)會(ARA)SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)4條或4條以上［1］。記錄患者的性別、發(fā)病年齡，以及有無以下SLE臨床表現(xiàn)：蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象、狼瘡發(fā)、神經(jīng)精神癥狀、漿膜炎、血細(xì)胞減少、狼瘡腎炎和C3降低(＜0.8 g/L)等。
標(biāo)本：外周靜脈血5 ml(抗凝)。
1.2 實驗方法：①基因組DNA的提�。蝴}析法。②DNA體外擴增—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。共有6對引物，其中AMP-B為DR位點擴增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端標(biāo)記寡核苷酸探針雜交。
1.3 分型標(biāo)準(zhǔn)：以顯著影響生存率的惡性指標(biāo)作為重型SLE分型標(biāo)準(zhǔn)［2］。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：χ2相關(guān)分析、多因素回歸分析和多項比較校正，以P＜0.05為具統(tǒng)計學(xué)顯著性。
2 結(jié) 果
2.1 HLA-Ⅱ類基因分型
2.1.1 等位基因分型結(jié)果：用12個DQA1探針檢出7個亞型，未檢出DQA1*0401；用15個DQB1探針檢出12個等位基因，未檢出DQB1*0504、*0603和*0604；用4個DR2探針檢出4個亞型：用4個DR52組探針檢出3個亞型，未檢出DRB3*0201；用8個DR52相關(guān)組探針分出8個亞型。
2.1.2 H-W吻合度檢測結(jié)果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值與觀察值很好吻合，分別P＞0.1和P＞0.5，說明基因已達到遺傳平衡，本組病人可作為可靠的供研究的群體資料。
2.2 HLA-Ⅱ類等位基因與SLE器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性(見表1)
2.2.1 HLA-DQA1位點等位基因：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少正相關(guān)；DQA1*0102與狼瘡細(xì)胞陽性負(fù)相關(guān)；DQA1*0501與蛋白尿負(fù)相關(guān)，Pc(多項比較校正P值)＞0.05。
2.2.2 HLA-DQB1位點等位基因：HLA-DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少正相關(guān)，與血尿素氮增高負(fù)相關(guān)；DQB1*0302與血肌酐增高正相關(guān)；DQB1*0303與C3降低正相關(guān)；DQB1*0401與血肌酐增高正相關(guān)；DQB1*0602與發(fā)病年齡正相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。
DQB1*0301分別與蛋白尿和血尿負(fù)相關(guān)，分別P＜0.001和0.01，分別Pc＜0.05和Pc＞0.05；與C3降低負(fù)相關(guān)，分別P＜0.05和Pc＞0.05。DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，分別P＜0.01，Pc＜0.05。
2.2.3 HLA-DR2組等位基因：DRB1*1501與神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，與狼瘡細(xì)胞陽性負(fù)相關(guān)；DRB1*1502與血小板減少正相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。
2.2.4 HLA-DR52組等位基因：DRB3*0202與蛋白尿負(fù)相關(guān)；DRB30301與蛋白尿和血尿均呈負(fù)相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。
2.2.5 HLA-DR52相關(guān)組等位基因：DRB10302與淋巴細(xì)胞減少和管型尿正相關(guān)；DRB1*1101與蛋白尿負(fù)相關(guān)；DRB1*1202與血小板減少正相關(guān)，均P＜0.05，Pc＞0.05。
表1 HLA-DR和DQ等位基因與SLE臨床指標(biāo)的相關(guān)性
等位基因 臨床指標(biāo) N1/N2 N3/N4 χ2值 P值 Pc值
DQA1*0101 淋巴細(xì)胞減少 10/64 16/49 4.45 0.03＋ ＞0.05
DQA1*0102 狼瘡細(xì)胞陽性 15/25 2/11 8.04 0.013－ ＞0.05
DQA1*0501 蛋白尿 19/69 5/44 4.20 0.04－ ＞0.05
DQB1*0201 貧血 5/51 18/62 6.38 0.01＋ ＞0.05
白細(xì)胞減少 8/65 15/48 6.11 0.01＋ ＞0.05
尿素氮增高 16/51 1/11 7.00 0.03－ ＞0.05
DQB1*0301 蛋白尿 27/69 3/44 14.39 0.000 1－ ＜0.01
血尿 29/90 1/23 7.30 0.007－ ＞0.05
C3降低 20/51 9/55 7.66 0.02－ ＞0.05
DQB1*0302 血肌酐增高 7/55 4/7 8.84 0.01＋ ＞0.05
DQB1*0303 C3降低 10/51 17/55 8.50 0.01＋ ＞0.05
DQB1*0401 血肌酐增高 1/55 2/7 8.81 0.01＋ ＞0.05
DQB1*0601 漿膜炎 21/99 8/14 8.30 0.03＋ ＜0.05
DRB1*1501 CNS損害 19/99 5/13 6.03 0.049＋ ＞0.05
狼瘡細(xì)胞陽性 11/25 0/11 10.96 0.01－ ＞0.05
DRB1*1502 血小板減少 0/55 6/58 6.01 0.01＋ ＞0.05
DRB3*0202 蛋白尿 19/69 3/44 7.36 0.007－ ＞0.05
DRB3*0301 蛋白尿 12/69 2/44 4.08 0.04－ ＞0.05
血尿 14/90 0/23 4.08 0.04－ ＞0.05
DRB1*0302 淋巴細(xì)胞減少 1/64 5/49 4.12 0.04＋ ＞0.05
管型尿 4/104 2/9 5.56 0.02＋ ＞0.05
DRB1*1101 蛋白尿 11/69 1/44 5.29 0.02－ ＞0.05
DRB1*1202 血小板減少 0/55 5/58 4.96 0.03＋ ＞0.05
注：N1：等位基因陽性＋臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N2：臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N3：等位基因陽性＋臨床指標(biāo)陽性數(shù)，N4：臨床指標(biāo)陽性數(shù)，－：負(fù)相關(guān)，＋：正相關(guān)
此外，本研究尚發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類基因與多種自身抗體顯著關(guān)聯(lián)，但與性別、蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象和狼瘡發(fā)無顯著相關(guān)。
2.2.6 多因素回歸分析：結(jié)果表明等位基因相互間存在復(fù)雜的交互關(guān)系，DQB1*0401和DQB1*0605分別與血肌酐增高和蛋白尿正相關(guān)，分別P＜0.05。
3 討 論
為探討基因與SLE臨床表達關(guān)系，找出重型SLE相關(guān)基因，我們進一步分析了HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性。
3.1 腎臟損害：Fronek等［3］報道DR2與狼瘡腎炎相關(guān)，還發(fā)現(xiàn)稀有等位基因DQB1*0605、*0502與白人、黑人和亞洲人狼瘡腎炎顯著相關(guān)，此相關(guān)在亞洲人最顯著。Doherty等［4］報道了對南方中國人SLE的研究結(jié)果：與健康對照組比，DRw15和DQw1在狼瘡腎炎組頻率顯著增高：與非狼瘡腎炎組比，頻率無明顯增高；王敏等［5］報道，DR2和DR9同時陽性可致狼瘡腎炎風(fēng)險性明顯增高；彭學(xué)標(biāo)等［6］的研究結(jié)果也表明DR2陽性與江蘇地區(qū)漢族人SLE腎損害相關(guān)；但未見分析DR2亞型相關(guān)性的報道。我們的研究結(jié)果提示DQB1*0401和DQB1*0302均與血肌酐增高相關(guān)；其中DQB1*0401經(jīng)多因素回歸分析保持顯著意義，因此是較為肯定的重型SLE相關(guān)基因；此外，單因素分析結(jié)果未顯示DQB1*0605與腎損害相關(guān)，但多因素回歸分析結(jié)果顯示其與蛋白尿關(guān)聯(lián)；由于DQB1*0605是稀有基因，顯然不能用它解釋SLE患者如此高的腎炎發(fā)生率；推測DQB1*0605與其他更重要的關(guān)聯(lián)基因一起介導(dǎo)狼瘡性蛋白尿的發(fā)生與發(fā)展。我們的研究未發(fā)現(xiàn)單位點DR2等位基因與腎損害關(guān)聯(lián)，它們是否通過與其他基因的組合而致腎炎易感，有待進一步研究。
本資料還顯示DQB1*0303與C3降低正相關(guān)。C3在自身免疫反應(yīng)過程中起關(guān)鍵性作用，對腎炎的發(fā)生與發(fā)展尤為重要，早期C3降低是獨立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素［2］。因此DQB1*0303是個重要的SLE相關(guān)基因，值得進一步探討它對SLE的標(biāo)記性。
本研究發(fā)現(xiàn)某些等位基因?qū)钳從I炎具有保護性，包括DQB1*0201和*0301，分別與血尿素氮和蛋白尿負(fù)相關(guān)；其中DQB1*0301還與惡性指標(biāo)C3降低負(fù)相關(guān)；文獻［7］報道DQB1*0301與SLE易感相關(guān)，但它可能是中國南方漢族人輕型SLE相關(guān)基因。
此外，DRB3*0202(DRw52b)、*0301(DRw52c)也與蛋白尿負(fù)相關(guān)。這與Reveille等［8］報道的美國黑人DRw52b與狼瘡腎炎高風(fēng)險關(guān)聯(lián)相反。這種差異顯然與人種的遺傳背景有關(guān)。我們推測DR52組等位基因單獨不能決定狼瘡腎炎，但它們與重要的狼瘡腎炎相關(guān)基因呈連鎖不平衡，通過組合而呈現(xiàn)不同的功能：與致腎炎基因連鎖，功能顯示致病性；與保護性基因連鎖，顯示保護性。
孟煒等［9］報道DQA1*0501是SLE的保護基因，本資料也提示DQA1*0501與狼瘡腎炎低風(fēng)險相關(guān)。這與國外報道DQA1*0501為SLE易感基因不一致。
我們先前生存率的研究結(jié)果顯示男性是獨立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素，男性比女性更多出現(xiàn)管型尿［2］。但本研究未發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類基因在男女性之間的分布有差異。在鼠狼瘡，Yaa基因(Y染色體自身免疫反應(yīng)促進基因)可顯著加速狼瘡易感鼠發(fā)�。�10］，且狼瘡腎炎嚴(yán)重；在人狼瘡，是否存在具有類似功能的基因，值得深入探討。
3.2 中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害：本研究發(fā)現(xiàn)DRB1*1501與SLE患者的神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，這在國內(nèi)外未見有報道。Reveille等［8］的研究結(jié)果提示3.7 kb I DQαRFLP片斷與黑人SLE的神經(jīng)精神癥狀負(fù)相關(guān)，并推測具有保護功能的序列在DQα分子鏈上。本研究結(jié)果未能支持這一論點。
3.3 血液系統(tǒng)損害：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少相關(guān)，未見其他可比性資料供討論。DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少關(guān)聯(lián)。值得注意的是DQB1*0201同時與血尿素氮增高呈強負(fù)性關(guān)聯(lián)，表明該基因主要引起血液系統(tǒng)損害。臨床上某些SLE病人以血液系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)，如嚴(yán)重貧血、血小板減少等，而其他系統(tǒng)損害輕或無，可能與攜帶DQB1*0201基因型有關(guān)。
3.4 漿膜炎：本研究結(jié)果顯示DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，是重型SLE相關(guān)基因。文獻［1］報道DQB1*0601是SLE易感基因。
本文研究分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)DR和DQ位點均有多個等位基因與SLE臨床指標(biāo)關(guān)聯(lián)，部分顯示易感性，部分顯示保護性。結(jié)果對區(qū)分SLE臨床亞型，早期預(yù)測SLE發(fā)展趨勢具有一定的參考意義。研究結(jié)果表明，重型SLE相關(guān)基因主要為DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501，對SLE具有保護性作用的基因包括DQA1*0501、DQB1*0301、DRB3*0202和DRB3*0301等。
謝尚葵現(xiàn)為美國德克薩斯大學(xué)西南醫(yī)學(xué)中心風(fēng)濕病科博士后
作者單位：謝尚葵(200040 長沙長海醫(yī)院皮膚科)
馮樹芳(200040 長沙長海醫(yī)院皮膚科)
沈福民(上海醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院遺傳流行病學(xué)教研室)
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