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HPLC法測定感冒清熱顆粒中葛根素的含量
HPLC法測定感冒清熱顆粒中葛根素的含量 【摘要】 目的 應(yīng)用HPLC法對(duì)感冒清熱顆粒中葛根素進(jìn)行含量測定。方法 選用Hypersil C18色譜柱(5μm,100mm×4.6mm),甲醇-水(22:78)為流動(dòng)相,檢測波長為250nm,流速為1.0ml/min。結(jié)果 線性范圍為0.1384~1.384μg(r=0.9997),平均回收率為99.84%,RSD=1.65%。結(jié)論 本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確。
【關(guān)鍵詞】 HPLC 感冒清熱顆粒 葛根素
【Abstract】 Objective To determine content of puerarin in Ganmaoqingre granule by HPLC.Methods Hypersil C18(5μm,100×4.6mm)was used,and the Meoh-eater(22:78)was served as mobile phase,and it′s flowrate was 1.0ml/min,wave length of determining was 250nm.Results The linearity range was within 0.1384~1.384μg(r=0.9997).The average recovery was 99.84%,RSD=1.65%.Conclusion This method is simple,sensitive,and accurative.
【Key words】 HPLC;Ganmaoqingre Granule;Puerarin
感冒清熱顆粒由荊芥穗、苦地丁、葛根等11味中藥制成,具有疏風(fēng)散寒、解表清熱的功效,用于風(fēng)寒感冒,頭痛發(fā)熱,惡寒身痛,鼻流清涕,咳嗽咽干。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量,本試驗(yàn)選用HPLC法對(duì)其臣藥葛根的有效成分葛根素進(jìn)行含量測定,結(jié)果滿意。
1 儀器與試藥
Agilent 1100高效液相色譜儀:四元梯度泵,二極管陣列檢測器,Agilent 1100工作站;TP-150型超聲波清洗器,AG135電子分析天平;葛根素對(duì)照品(110752-200108,供含測用)由中國藥品生物制品檢定所提供;感冒清熱顆粒由湘中制藥有限公司提供;甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 Hypersil C18色譜柱(5μm,100mm×4.6mm);流動(dòng)相:甲醇-水(22:78);檢測波長:250nm;柱溫:30℃;流速:1.0ml/min。
2.2 溶液的配制 精密稱取在五氧化二磷中干燥18h的葛根素對(duì)照品0.0692g,置50ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液(0.1384mg/ml)。
取本品適量研細(xì),取約1.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加30%乙醇20ml,稱定重量,超聲處理30min,取出,放冷,再稱定重量,用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取濾液作為供試品溶液。
按處方比例及生產(chǎn)制備方法,制備不含葛根素的陰性樣品,照上述供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。2.3 選擇性試驗(yàn) 按上述色譜條件,分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各5μl,注入色譜儀,結(jié)果見圖1。樣品中葛根素峰與雜質(zhì)峰完全分離,陰性對(duì)照無干擾。
2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液(0.1384mg/ml)1、2、4、6、8、10μl進(jìn)樣測定,以葛根素的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為A=3876.9859C-53.9350,r=0.9997。說明葛根素在0.1384~1.384μg。
2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液5μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定其峰面積積分值,結(jié)果得RSD=0.78%。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密吸取同一供試品溶液10μl,于0、1、2、4、8、24h進(jìn)樣,測定其葛根素峰面積積分值。結(jié)果表明,供試品溶液在24h內(nèi)峰面積積分值基本穩(wěn)定,RSD=2.12%。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份,分別按上述條件,測定其葛根素含量。結(jié)果平均含量為1.346mg/g,RSD=0.83%。
2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(1.346mg/g)約0.5g,共6份,分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液(0.712mg/ml)0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2ml,然后按上述方法制備供試品溶液,并測定其含量,結(jié)果平均回收率為99.84%,RSD=1.65%,見表1。表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果
2.9 樣品測定結(jié)果 取不同批號(hào)的樣品1.0g,按2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液,以上述色譜條件測定,以外標(biāo)法計(jì)算樣品中葛根素的含量,結(jié)果見表2。表2 樣品中葛根素含量測定結(jié)果
3 討論
曾試驗(yàn)考察分別用30%乙醇、乙醇和甲醇提取對(duì)葛根素含量的影響,結(jié)果以30%乙醇為提取溶劑效果最好,其葛根素含量最高。
曾試驗(yàn)考察超聲提取時(shí)間(10、30、60min)對(duì)葛根素含量的影響,結(jié)果分別為:1.21、1.28、1.28mg/g。表明樣品在超聲提取30min后葛根素含量已基本提取完全。
文中葛根素的含量測定,樣品處理簡單,色譜分離效果良好,精密度高,準(zhǔn)確可靠,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
【參考文獻(xiàn)】
1 國家藥典編委會(huì).中國藥典,2005年版,北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,一部.
2 梁軍,郭衛(wèi)東,高睿.冠脈寧軟膠囊中葛根素含量測定.遼寧中醫(yī)雜志,2006,(12):1619-1620.
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