泌尿生殖道支原體和衣原體檢測(cè)的現(xiàn)狀和存在問(wèn)題

泌尿生殖道支原體和衣原體檢測(cè)的現(xiàn)狀和存在問(wèn)題[關(guān)鍵詞] 支原體 衣原體 檢測(cè)

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   [摘 要］對(duì)泌尿生殖道支原體和衣原體檢測(cè)的現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，著重分析目前支原體和衣原體檢測(cè)中存在的亟待解決的問(wèn)題。��    解脲脲原體（UU）、人型支原體（MH）、生殖支原體（MG）和沙眼衣原體（CT）都是寄生在泌尿生殖道的病原體，常引起泌尿生殖道疾患。支原體和衣原體感染不但是非淋菌性尿道炎（NGU）的最主要病因(90%以上)，且已成為發(fā)病率最高的性傳播疾病，已越來(lái)越受到重視。但由于技術(shù)局限，目前對(duì)其檢測(cè)仍存在不少問(wèn)題亟待解決。筆者結(jié)合自己的工作經(jīng)驗(yàn)，綜述并分析泌尿生殖道支原體和衣原體檢測(cè)的現(xiàn)狀和存在問(wèn)題，以裨于試劑的改進(jìn)和臨床檢測(cè)方法的提高。��1 檢測(cè)現(xiàn)狀    1.1 培養(yǎng)法 支原體可用人工合成培養(yǎng)基培養(yǎng)，由于不具有甾醇合成能力，培養(yǎng)系統(tǒng)應(yīng)添加含甾醇等長(zhǎng)鏈不飽和脂肪醇豐富的物質(zhì)，一般采用SP��4培養(yǎng)基加馬血清。MG生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分復(fù)雜，生長(zhǎng)極緩慢，一般需2周～3月。CT必須采用細(xì)胞培養(yǎng)，一般用McCoy細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)，但細(xì)胞培養(yǎng)需專業(yè)化技術(shù)、試劑和設(shè)備，要求較高，周期也較長(zhǎng)，目前臨床一般不采用，僅在科研單位進(jìn)行科研活動(dòng)，或作為新診斷試劑方法學(xué)評(píng)價(jià)的金標(biāo)準(zhǔn)。培養(yǎng)法不能快速檢測(cè)支原體感染，一般UU和MH需2～3天才能出結(jié)果。不過(guò)隨著實(shí)驗(yàn)水平提高，市面上已出現(xiàn)一些24 h可出結(jié)果的試劑。但MG尚未實(shí)現(xiàn)24 h培養(yǎng)出結(jié)果，因此臨床上不采用培養(yǎng)法檢測(cè)MG，僅用于科研活動(dòng)。    目前臨床培養(yǎng)法檢測(cè)UU和MH多采用液體培養(yǎng)基，加樣培養(yǎng)變色判斷結(jié)果。理論上這種變色也可能由于其它微生物代謝而發(fā)生，因此要求變色后過(guò)濾除菌，再接種到固體培養(yǎng)基上觀察菌落。若培養(yǎng)基選用適當(dāng)抗生素，有效地抑制雜菌生長(zhǎng)，單純液體培養(yǎng)基結(jié)果就有相當(dāng)高的臨床可信度。即使有個(gè)別變色是雜菌所致，標(biāo)本病人也有細(xì)菌性炎癥，采用抗生素也不為過(guò)。    1.2 免疫法 采用此法檢測(cè)的試劑目前臨床較常用。一般為間接法（ELISA法或金標(biāo)法）檢測(cè)抗體，比較而言金標(biāo)法檢測(cè)抗體的試劑用得更多；而用于檢測(cè)支原體抗原的試劑目前尚未商品化。此類試劑一般采用夾心法檢測(cè)CT特異性脂多糖抗原(LPS)，影響較大的有金標(biāo)試劑和免疫熒光試劑。由于免疫反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的高效性或熒光信號(hào)的高敏性，故此類試劑理論上靈敏度和特異性都較高。    1.3 PCR法 此類衣原體試劑有定性和定量（多是PCR酶免試劑）兩類，而支原體試劑只有定性一類。PCR反應(yīng)有較高的靈敏度，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件、試劑以及操作人員的要求都較高，操作不當(dāng)易造成錯(cuò)誤判斷，并且PCR定性試劑一般沒(méi)有藥品批準(zhǔn)文號(hào)，臨床上使用應(yīng)慎重。定量試劑有藥品批準(zhǔn)文號(hào)，但面市不久，尚處于推廣中�？蒲袉挝皇褂肞CR試劑一般用于鑒定血清型，而醫(yī)療單位使用PCR定量試劑多用于臨床療效觀察。    1.4 快速生化法 由于支原體生化酶反應(yīng)速度和特異性都存在問(wèn)題，目前尚無(wú)檢測(cè)支原體快速生化法試劑，但衣原體已有此方法學(xué)試劑。國(guó)內(nèi)開(kāi)發(fā)的生殖道CT生化檢測(cè)試劑即為此類，它是根據(jù)CT侵染上皮細(xì)胞后產(chǎn)生的獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，配以生化酶試劑與之反應(yīng)，觀察變色與否判斷結(jié)果。臨床觀察資料表明，以細(xì)胞培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，此試劑的靈敏度和特異性分別為87%以上和97%以上，加之價(jià)格較低，具有良好的應(yīng)用前景。2 存在問(wèn)題    2.1 由于支原體在人群中廣泛存在，許多正常人也有低滴度抗體水平，單純根據(jù)一次抗體檢測(cè)結(jié)果，很難判斷標(biāo)本病人是既往感染還是現(xiàn)癥感染，再次測(cè)定支原體抗體滴度增加時(shí)方可判為支原體陽(yáng)性。為此要求檢測(cè)支原體抗體的應(yīng)為定量試劑，而目前國(guó)內(nèi)間接法檢測(cè)支原體抗體的試劑都是定性試劑，且有一定的市場(chǎng)占有率，這就說(shuō)明了為什么許多病人檢測(cè)抗體為陽(yáng)性而培養(yǎng)則為陰性［1］，也在一定程度上影響了病情的確診。國(guó)內(nèi)有些科研單位正研制間接法檢測(cè)支原體抗原的試劑［2］，直接檢測(cè)病原體抗原，因此比檢測(cè)抗體試劑有更高的特異性和準(zhǔn)確性�；�于支原體抗體定性檢測(cè)試劑的可靠性存在問(wèn)題，在檢測(cè)支原體抗體定量試劑和支原體抗原試劑商品化之前，宜采用液體培養(yǎng)法。    2.2 MG診斷問(wèn)題 以往資料顯示MG感染率不超過(guò)5%，鑒于培養(yǎng)周期長(zhǎng)，有關(guān)研究又不多，臨床一般不檢測(cè)MG。但有資料表明MG的陽(yáng)性率并不低（14.1%）［3］，以前資料的低感染率可能是試劑的靈敏度偏低所致。因此進(jìn)一步開(kāi)展MG的研究，開(kāi)發(fā)臨床適用的試劑，應(yīng)是當(dāng)前工作重點(diǎn)之一。    2.3 支原體計(jì)數(shù)的可靠性問(wèn)題 目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上銷售的支原體藥敏試劑，一般都帶支原體計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)的前提必須是標(biāo)本采集量的標(biāo)準(zhǔn)化，若標(biāo)本采集量不標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)數(shù)就是空談。血清標(biāo)本比較容易定量采集，而支原體測(cè)定所取的標(biāo)本是分泌物或中段尿，則不容易定量采集。    對(duì)于分泌物來(lái)講，采集標(biāo)本量時(shí)多時(shí)少，如果這次取的分泌物少，而分泌物中支原體數(shù)量≥10��4，采用所謂的可計(jì)數(shù)的試劑檢測(cè)可能會(huì)得到支原體數(shù)量<10��4的結(jié)果；同樣中段尿是一個(gè)定性且很泛的概念，每次不可能取到相同位置的中段尿，也不可能標(biāo)準(zhǔn)化。既然取樣不能標(biāo)準(zhǔn)化，計(jì)數(shù)就不科學(xué)，可能給臨床治療工作帶來(lái)誤導(dǎo)。市面上的試劑帶計(jì)數(shù)功能的可能原因：①?gòu)S家沒(méi)有意識(shí)到標(biāo)本采集量的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題；②故弄噱頭和跟風(fēng)。衣原體PCR定量試劑也是測(cè)分泌物，存在同樣問(wèn)題。    2.4 發(fā)病率高而陽(yáng)性率低的問(wèn)題 隨著與國(guó)際接軌，發(fā)病率可比性會(huì)增加。西方國(guó)家NGU中UU陽(yáng)性率一般為40%～60%（含多重感染，下同），MH陽(yáng)性率一般為20%～50%，CT陽(yáng)性率一般為25%～55%［4～6］。而縱觀近十年國(guó)內(nèi)臨床資料，UU陽(yáng)性率一般為20%～30%，MH陽(yáng)性率一般為10%～20%，CT陽(yáng)性率一般為16.2%～27.0%［7］，國(guó)內(nèi)明顯比國(guó)外低，臨床實(shí)際的陽(yáng)性率更低，究其原因，可做以下分析。    支原體試劑靈敏度偏低的原因：①?zèng)]有充分考慮支原體生長(zhǎng)增殖所需的最佳條件；②僅考慮其它微生物存在造成的假陽(yáng)性而沒(méi)考慮某些微生物存在會(huì)抑制支原體的生長(zhǎng)繁殖；③為了對(duì)UU和MH鑒別，培養(yǎng)基一般添加野株天然耐藥的抗生素，但臨床株可能在進(jìn)化過(guò)程中突變而對(duì)這種抗生素敏感，導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。我們?cè)谂R床工作中發(fā)現(xiàn)一種支原體試劑，性病門診UU陽(yáng)性率為60.65%，MH陽(yáng)性率為23.26%，與國(guó)外資料比較符合，并且與國(guó)內(nèi)程文獻(xiàn)報(bào)道（58.97%）接近［8］，與此對(duì)比國(guó)內(nèi)另一種同類試劑UU陽(yáng)性率為22.17%，MH陽(yáng)性率為9.35%。有些正常人通過(guò)液體培養(yǎng)基培養(yǎng)可能判為陽(yáng)性，這些人雖無(wú)任何癥狀，但其作為支原體攜帶者可看作泌尿生殖道炎癥性疾病的危險(xiǎn)人群，臨床上也應(yīng)予以高度重視。    衣原體試劑陽(yáng)性率低的原因更多，除去實(shí)驗(yàn)操作影響，① 衣原體是寄生在上皮細(xì)胞內(nèi)，采樣若沒(méi)采到上皮細(xì)胞，勢(shì)必造成假陰性；② 抗原提取不徹底（只有破壞衣原體細(xì)胞壁，其LPS才溶出），或抗原被破壞（LPS 82℃分解破壞），也可造成假陰性；③試劑盒生產(chǎn)所用的單抗相應(yīng)的衣原體血清型可能存在地區(qū)差異或變異，因?yàn)樵谂R床工作中我們發(fā)現(xiàn)，某同一批號(hào)衣原體試劑在有些地區(qū)（并不一定是性病高發(fā)區(qū)）的陽(yáng)性率比較接近廠家標(biāo)示的水平，而在另外一些地區(qū)（有些還是性病高發(fā)區(qū)）的陽(yáng)性率則遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于廠家標(biāo)示的水平；④ 試劑本身靈敏度低。�ぃ蹍� 考 文 獻(xiàn)］［1］ 楊玉英，張學(xué)寧，沈秀芬，等.生殖道支原體感染三種檢測(cè)方法的比較［J］.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2001，16（1）：37-38.［2］ 李洪星，趙季文，徐萃瑜，等.LEIA檢測(cè)人型支原體抗原方法的研究［J］.南京鐵道醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，14（2）：86-88.［3］ 王荷英，施美琴，葉順章，等.非淋菌性尿道炎的生殖支原體檢測(cè)［J］.中華皮膚科雜志，1998，31（3）：149-151.［4］ Faro S.Chlamydia trachomatis:female pelvic infection［J］.Am J Obstet Gynecol，1991，164:1767.［5］ McGregor JA,French JI.Chlamydia Trachomatis infection during pregnancy［J］.Am J ObstetGynecol,1991，164:1782［6］ Hillis SD,Nakashima A,Marchbanks PA,�玡t al��.Risk factors for recurrent Chlamydia Trachomatis infections in women［J］.Am J Obstet Gynecol,1994，170:801.［7］ 葉順章，宦秉瑜，鐘鏡增，等.我國(guó)部分地區(qū)性病高危人群生殖道衣原體感染和HIV抗體的調(diào)查［J］.中華皮膚科雜志，1993，26（4）：201-203.［8］ 程文海，謝禮豪，盧和琨，等.女性非特異性生殖道感染中段尿和陰道拭子培養(yǎng)解脲支原體［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，1999，13（5）：288-289.［作者單位］鄭州博賽生物工程有限責(zé)任公司,河南 鄭州 450001［作者簡(jiǎn)介］王則宇（1972-），男，河南省平輿人，工程師，理學(xué)學(xué)士，主要從事微生物快速檢測(cè)和藥敏鑒定的研究。      中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志

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