腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測進(jìn)展

腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測進(jìn)展腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測進(jìn)展  
發(fā)布時間： 2003-10-15  作者：謝志堅綜述 吳求亮審校  
腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最基本的生物學(xué)特征，是一系列具有內(nèi)在聯(lián)系的多個步驟
相互作用的結(jié)果，最早是Liotta提出的粘附、降解、移動學(xué)說，每個步驟也是有多
個因素的共同參與，因而其具有復(fù)雜性。它是目前腫瘤患者死亡的主要原因。當(dāng)前
確定腫瘤轉(zhuǎn)移主要是依據(jù)常規(guī)病理切片的結(jié)果，但有些患者雖進(jìn)行了根治手術(shù)，且
常規(guī)病理切片淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移，但隨后仍出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。所以單純根據(jù)常規(guī)病理切片
來進(jìn)行預(yù)后的判斷往往欠科學(xué)，因此急需發(fā)展新的手段來檢測腫瘤的轉(zhuǎn)移。近年來
隨著免疫學(xué)與分子生物學(xué)的發(fā)展，為更敏感地檢測到淋巴道、血道中轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)
胞提供可能，本文對該領(lǐng)域的研究進(jìn)展作一綜述。

1 常規(guī)病理學(xué)方法

    淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測通常是HE染色，但敏感性較低，一般為104～105個正常細(xì)胞
中能檢出一個腫瘤細(xì)胞，連續(xù)切片檢測能增加結(jié)果的穩(wěn)定性，最早對淋巴結(jié)的微小
轉(zhuǎn)移灶的檢測方法是連續(xù)切片法，有作者對400例乳腺癌常規(guī)切片陰性的淋巴結(jié)進(jìn)
行連續(xù)切片檢測，檢出率為13%。Wilkinson和Fisher的研究表明連續(xù)切片檢測可使
檢出率提高14%～24%。但由于該法工作量大且有較高的假陰性，所以難以推廣應(yīng)用
。

2 免疫組織化學(xué)方法

2.1 粘附分子
    腫瘤要產(chǎn)生轉(zhuǎn)移必須先從原發(fā)灶脫落，然后游走至血管、淋巴管，與之產(chǎn)生粘
附并進(jìn)入管腔才能產(chǎn)生轉(zhuǎn)移，而粘附分子在其中起著重要作用。粘附分子有許多種
類，與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)的研究主要集中在上皮粘附素(E�瞔adherin)和CD44這兩個
因子上。

2.1.1 上皮粘附素
    E�瞔adherin是一種鈣依賴性的具有使細(xì)胞之間產(chǎn)生粘附功能的糖蛋白，是產(chǎn)
生細(xì)胞連接的分子基礎(chǔ)。有研究表明許多腫瘤如乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌均
可出現(xiàn)E�瞔adherin的減少，E�瞔adherin的減少使腫瘤細(xì)胞之間的粘附力降低，腫
瘤細(xì)胞容易脫落而出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。因此E�瞔adherin被看作抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的因素［1］。
Hunt［2］的研究表明，對于較小的乳腺腫瘤，E�瞔adherin的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移具有
相關(guān)性，認(rèn)為E�瞔adherin的減低是腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的早期事件。

2.1.2 CD44
    另一個粘附分子CD44主要參與細(xì)胞與基質(zhì)間的粘附，且參與細(xì)胞的偽足形成，
與細(xì)胞的遷移有關(guān)［3］。許多研究表明，CD44基因的表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移具有顯著
相關(guān)性，尤其CD44v與細(xì)胞骨架的相互作用在腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中起著重要作用［
4］。且CD44v6陽性患者的預(yù)后顯著較差，經(jīng)多因素分析認(rèn)為CD44v6是獨立于腫瘤
分期、淋巴結(jié)狀態(tài)的預(yù)后指標(biāo)［5］。

2.1.3 其他粘附分子
    其他的粘附分子有整合素族與選擇素族。整合素族為細(xì)胞表面的糖蛋白受體，
是由α、β亞單位通過非共價鍵連接的異二聚體，可以與纖粘蛋白、層粘蛋白、膠
粘蛋白等結(jié)合，參與細(xì)胞與基質(zhì)的粘附。有研究表明，惡性腫瘤細(xì)胞間粘附力降低
、侵襲力增加與整合素受體表達(dá)下降有關(guān)，Gui的研究對正常、良性、惡性乳腺組
織的整合素受體表達(dá)水平進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的整合素受體表達(dá)明顯下降，
多因素分析結(jié)果表明β��1、α��1、α�瞯亞屬可作為乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要
指標(biāo)。選擇素族有P、E、L三種亞型，有研究表明E�策x擇素在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中起著
重要作用［6］。

2.2 自分泌運動因子及受體
    自分泌運動因子(AMF)是一種分子量為55KD��66KD的熱溶蛋白質(zhì)，它是一個家
族，通過與受體(AMFR)作用而刺激細(xì)胞運動，AMFR是一個分子量為78KD的糖蛋白，
研究證實AMF受體gp78的表達(dá)直接與腫瘤的轉(zhuǎn)移能力有關(guān)，人癌標(biāo)本中的gp78表達(dá)
與臨床病理特征和病人預(yù)后有關(guān)。Maruyama［7］的研究表明101例食道癌中有55例
gp78表達(dá)陽性，它的表達(dá)與腫瘤生長方式、腫瘤大小有關(guān)，且淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者gp7
8表達(dá)率較高，說明與AMFR相關(guān)的腫瘤細(xì)胞運動促進(jìn)了腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移。有淋巴
轉(zhuǎn)移的大腸癌其gp78表達(dá)率明顯增高，gp78陽性患者的5年生存率明顯低于陰性者
［8］。

3 多聚酶聯(lián)反應(yīng)(PCR)方法

    近年來，在這方面的研究取得了長足的進(jìn)展，多采用RT�睵CR法擴(kuò)增外周血、
骨髓或淋巴結(jié)在正常情況下不表達(dá)的組織或腫瘤特異性mRNA，其敏感性為1×106。
因為mRNA在細(xì)胞外很不穩(wěn)定，所以一旦在組織或體液中檢測到特異性mRNA就意味著
有腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，且有些腫瘤盡管有RNA表達(dá)但無蛋白表達(dá)，因此RT�睵CR法比蛋白
測定具有更高敏感性。

3.1 前列腺特異性抗原mRNA
    有研究者對前列腺癌的微轉(zhuǎn)移進(jìn)行了研究，檢測了前列腺癌患者外周血、骨髓
或淋巴結(jié)中前列腺特異性抗原(PSA)表達(dá)，結(jié)果表明：在確定有轉(zhuǎn)移的患者外周血
中PSA的檢出率為40%，顯著高于無轉(zhuǎn)移的10%。且具有良好的特異性［9，10］。

3.2 細(xì)胞角蛋白mRNA
    細(xì)胞角蛋白(CK)是一個多基因家族，主要在上皮細(xì)胞表達(dá)，CKs有20多個不同
亞類構(gòu)成，主要有CK8、CK19、CK20等，由于CK8、CK19能在正常人外周血中表達(dá)，
而CK20不在外周血中表達(dá)，所以CK20可作為有些腫瘤如乳腺癌、膀胱癌和大腸癌的
血道轉(zhuǎn)移指標(biāo)［11］。Soeth用巢式RT�睵CR監(jiān)測了57例大腸癌患者的骨髓CK20mRN
A表達(dá)，陽性率為65%［12］。CK19作為乳腺癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移指標(biāo)也取得了較好的結(jié)
果，10個常規(guī)切片陽性的淋巴結(jié)CK19mRNA也為陽性，而53個陰性淋巴結(jié)中有5個CK
19mRNA為陽性，表示有微小轉(zhuǎn)移［13］。CK是目前檢測腫瘤微轉(zhuǎn)移使用較多的一個
指標(biāo)。特別是檢測食道癌與頭頸鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移方面，得到大家的認(rèn)可。

3.3 酪氨酸酶mRNA
    酪氨酸酶是黑色素細(xì)胞合成黑色素的關(guān)鍵酶，在正常情況下黑色素細(xì)胞不會出
現(xiàn)在外周血，所以一旦在外周血檢出酪氨酸酶可提示有血道轉(zhuǎn)移。Wang［14］對2
9例黑色素瘤患者的區(qū)域淋巴結(jié)，其中一半作HE染色，不確定時作HMB��45或S��10
0免疫組化染色，另一半作酪氨酸酶mRNA的RT�睵CR檢測。29例臨床Ⅰ、Ⅱ期黑色素
瘤常規(guī)病理檢查有11例淋巴結(jié)陽性，而檢出酪氨酸酶的有19例，18例陰性的淋巴結(jié)
RT�睵CR陽性有8例，平均隨訪1年后，這8例患者全部復(fù)發(fā)。因此酪氨酸酶mRNA的R
T�睵CR對于判斷術(shù)后是否需要全身化療以及化療效果具有指導(dǎo)意義。有研究者報道
，應(yīng)用RT�睵CR法能敏感地檢出黑色素瘤免疫治療后患者血與骨髓中的殘留細(xì)胞，
對預(yù)示復(fù)發(fā)及探討復(fù)發(fā)機(jī)制具有重要意義。

3.4 腫瘤排斥抗原mRNA
    腫瘤排斥抗原MAGE也被列為腫瘤轉(zhuǎn)移指標(biāo)，有研究表明，94%的食道癌，81%的
大腸癌，80%的乳腺癌，83%的胃癌在12種MAGE基因亞型中至少有一種陽性。在14例
常規(guī)病理檢查為陰性的淋巴結(jié)中，有7例MAGE陽性，其中有5例出現(xiàn)血管侵襲。該方
法的特異性高，假陽性率很低，但由于有12種基因亞型給實驗操作帶來困難。

3.5 癌胚抗原mRNA
    癌胚抗原CEA曾被廣泛用于惡性腫瘤的診斷，近來有研究表明檢測外周血中CE
AmRNA的表達(dá)可以作為是否存在血道轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，31例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中有26
例外周血CEAmRNA的表達(dá)陽性［15］。從102例消化道腫瘤、乳腺癌的606個淋巴結(jié)
中進(jìn)行CEA檢測發(fā)現(xiàn)，常規(guī)組織切片淋巴結(jié)陽性率為16%，而CEA診斷陽性率為56%。
從預(yù)后結(jié)果來看，CEA與組織學(xué)診斷的陽性率在根治切除患者中分別為64%與4%，在
相對治愈切除患者中分別為85%與37%，在姑息切除患者中分別為100%與86%，在復(fù)
發(fā)患者中分別為100%與85%。由此可見CEAmRNA可作為一個重要的檢測指標(biāo)。Mori［
16］對13例大腸癌患者的117個淋巴結(jié)進(jìn)行了CEAmRNA檢測，發(fā)現(xiàn)88個常規(guī)檢測陰性
的患者淋巴結(jié)有47個淋巴結(jié)CEAmRNA陽性。該作者還對65例消化道腫瘤及乳腺癌患
者的406個淋巴結(jié)進(jìn)行CEAmRNA的RT�睵CR檢測并進(jìn)行了隨訪，微轉(zhuǎn)移率為40.1%，有
淋巴轉(zhuǎn)移的15例患者6例復(fù)發(fā)，29例有微轉(zhuǎn)移的患者4例復(fù)發(fā)。21例無微轉(zhuǎn)移患者無
復(fù)發(fā)，這進(jìn)一步說明了CEAmRNA的重要性［17］。

3.6 蛋白溶解酶類mRNA
    癌細(xì)胞合成和釋放溶解酶是促進(jìn)癌細(xì)胞從瘤體分離繼而引起轉(zhuǎn)移的一個重要因
素。腫瘤部位細(xì)胞外液中許多酶活性增高，如肽酶和組織蛋白酶，這些酶多來自于
癌細(xì)胞的溶酶體，也可來自腫瘤壞死區(qū)的巨噬細(xì)胞，這些酶在癌細(xì)胞分解細(xì)胞外基
質(zhì)與松解細(xì)胞粘附中起重要作用。

3.6.1 內(nèi)糖苷酶mRNA
    內(nèi)糖苷酶能特異地降解基底膜成分硫酸乙酰肝素，該酶的活性與一些腫瘤細(xì)胞
的轉(zhuǎn)移能力有關(guān)［18］。

3.6.2 Ⅳ型膠原酶mRNA
    Ⅳ型膠原是基底膜的主要成分，它能被Ⅳ型膠原酶特異性水解，它至少有三種
不同形式，它不僅能降解Ⅳ型膠原，還能降解Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ型膠原，纖粘蛋白，
彈性蛋白及白明膠。有研究發(fā)現(xiàn)，該酶的水平在許多高轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞中增加，因
此該酶在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中起著重要作用。在小鼠雜交瘤細(xì)胞和癌基因轉(zhuǎn)染的細(xì)
胞中，Ⅳ型膠原酶的表達(dá)與轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。Pyke等利用原位雜交發(fā)現(xiàn)在大部分浸潤
型基底細(xì)胞癌和鱗癌中可見Ⅳ型膠原酶的mRNA表達(dá)［19］。有研究者對高轉(zhuǎn)移與非
轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì)胞株的金屬蛋白酶2(MMP2)表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì)胞株
主要表達(dá)MMP2，且MMP2的活性與淋巴轉(zhuǎn)移和對局部下頜骨侵襲顯著相關(guān)［20］。

3.6.3 血纖維蛋白溶酶原激活酶mRNA
    血纖維蛋白溶酶原激活酶(PA)是一種特異性的絲氨酸蛋白酶，它催化非活性血
纖維蛋白酶轉(zhuǎn)化為活性血纖維蛋白酶。血纖維蛋白酶是一種廣譜蛋白酶。它催化血
纖維蛋白、粘連蛋白及層粘連蛋白。還能活化潛在的蛋白酶。它以組織型(t�睵A)
與尿激酶(u�睵A)型兩種形式存在，它們的功能是不同的，參與癌侵襲與轉(zhuǎn)移的是
u�睵A。

3.6.4 組織蛋白酶B、DmRNA
    組織蛋白酶B、D是溶酶體蛋白酶，參與對細(xì)胞外基質(zhì)的溶解，有一些實驗結(jié)果
表明，它們也與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)［21］。

3.7 血管內(nèi)皮生長因子C及受體mRNA
    血管內(nèi)皮生長因子(VEGF�睠)是血管內(nèi)皮生長因子家族中的一員，是近年來才
被發(fā)現(xiàn)的一種生長因子。Jeltsch［22］發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮生長因子C基因鼠皮下出現(xiàn)
大量擴(kuò)張淋巴管，這才確立了血管內(nèi)皮生長因子C在淋巴管生成中的重要地位。它
可由腫瘤細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，作用于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的酪氨酸激酶受體(flt��
4)而后出現(xiàn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖。這樣，對腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制有了新的、更進(jìn)
一步的認(rèn)識。有研究者運用原位雜交技術(shù)對前列腺癌的血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF��
C)及受體的表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子C及受體mRNA表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)
移陽性組明顯高于陰性組［23］。Kurebayashi［24］對乳腺癌的VEGF�睞、B、C、
D的mRNA進(jìn)行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組只表達(dá)VEGF�睠，這進(jìn)一步說明了VE
GF�睠在淋巴轉(zhuǎn)移中的重要作用。但也有作者發(fā)現(xiàn)在惡性間皮瘤中VEGF�睠的表達(dá)與
淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)［25］。在這一方面還存在較大的爭論。我們認(rèn)為從理論上說既然腫
瘤淋巴轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)部位，通過腫瘤周圍淋巴管游走至淋巴結(jié)，且有充
分證據(jù)證明VEGF�睠是與淋巴管增生有關(guān)，那么VEGF�睠很可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移的過程
，這當(dāng)然需要研究的更進(jìn)一步證實。

4 基因水平分析方法

    腫瘤基礎(chǔ)研究表明，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移須通過多個步驟才能完成，且每個步驟多由
多個基因共同控制，只有在轉(zhuǎn)移相關(guān)基因與轉(zhuǎn)移抑制基因平衡失調(diào)才最終決定是否
導(dǎo)致轉(zhuǎn)移。近年來有關(guān)該領(lǐng)域的研究一直是腫瘤基礎(chǔ)研究的熱點。由于腫瘤的發(fā)生
發(fā)展與癌基因的激活有關(guān)，所以部分癌基因的表達(dá)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。1984年
Vousden等發(fā)現(xiàn)小鼠淋巴瘤有了活化的c�睰�瞨as基因表達(dá)時，同時也就獲得了轉(zhuǎn)移
性。1987年Collard以人的c�睭�瞨as癌基因轉(zhuǎn)染非侵襲性、無轉(zhuǎn)移能力的小鼠BW5
147T淋巴瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞侵襲力增高，將這種細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射，可發(fā)
生肝、腎等器官的轉(zhuǎn)移，且這種轉(zhuǎn)移與細(xì)胞的ras基因的表達(dá)水平有關(guān)。有研究者
用fos基因轉(zhuǎn)染大鼠3Y1細(xì)胞，可使其獲得較高的肺轉(zhuǎn)移能力。

    隨著近年來對癌基因的臨床意義的闡明，一些癌基因不僅可作為腫瘤的常規(guī)診
斷指標(biāo)，而且可被列為轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。原癌基因RET可作為轉(zhuǎn)移性髓樣甲狀腺癌的診
斷指標(biāo)［26］；Zhang［27］的研究表明P53基因突變可作為結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的
前兆，而在頭頸部鱗癌中P53基因的過表達(dá)也有明確的診斷意義：P16往往表達(dá)在轉(zhuǎn)
移的淋巴結(jié)中［28］；c�瞖rbB��2已被列為膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌的惡性指標(biāo)；
最近有研究發(fā)現(xiàn)口腔與肺鱗癌中有c�瞖rbB��2的過表達(dá)［29］。有研究者［30］從
鼠高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞中篩選出轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mtal，它在高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株中的表
達(dá)比低轉(zhuǎn)移株高4位，且與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。還有研究者［31］發(fā)現(xiàn)c�睲yc與Bcl��2
基因在乳腺癌中的共同表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

5 展 望

    腫瘤轉(zhuǎn)移一直是腫瘤基礎(chǔ)研究的熱點，隨著近年來分子生物學(xué)的發(fā)展，在該領(lǐng)
域研究取得了突破，但怎么找到更敏感，更具特異性的指標(biāo)始終是腫瘤研究工作者
的奮斗目標(biāo)。敏感性提高的同時怎樣降低假陽性率，確定腫瘤微轉(zhuǎn)移與個體的預(yù)后
之間的關(guān)系，以及闡明腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因之間的相互作用還需我們付出更多的努力
，總之，隨著腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)理因素的進(jìn)一步闡明，必將對腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診斷、
治療方案的選擇及預(yù)后的判斷帶來深遠(yuǎn)的影響。

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