|
Hep-2型細胞/靈長類肝組織復(fù)合片檢測抗核抗體的應(yīng)用
【關(guān)鍵詞】 復(fù)合片
【摘要】 目的 探討用間接免疫熒光法檢測抗核抗體(ANA)時復(fù)合抗原片的應(yīng)用價值。 方法 分別用3種抗原片(Hep-2型細胞/靈長類肝組織復(fù)合片,Hep-2型細胞片,鼠肝勻漿片)檢測抗核抗體,比較檢出率和特異性。 結(jié)果 復(fù)合抗原片的檢出率高、特異性好。 結(jié)論 運用Hep-2型細胞/靈長類肝組織復(fù)合抗原片檢測ANA,有利于對自身免疫性疾病的初步篩選和判斷。
關(guān)鍵詞 復(fù)合片 抗核抗體
在自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、干燥綜合征(SS)、皮肌炎、硬皮病患者的血清中常存在自身抗體;間接免疫熒光法(IIF)是檢測細胞內(nèi)抗原自身抗體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。其檢測用的抗原片一般為組織培養(yǎng)細胞、器官冰凍切片、鼠肝勻漿片等,現(xiàn)將用Hep-2型細胞/靈長類肝組織復(fù)合抗原片檢測抗核抗體(ANA)的臨床應(yīng)用情況報告如下。
1 材料與方法
1.1 血清標(biāo)本 患者組:來自我院2003年1月~2004年10月住院和門診患者,共計65例。其中SLE38例,皮肌炎9例,硬皮病9例,SS7例,混合組織結(jié)締病2例,所有患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對照組30例,均為健康體檢者。
1.2 試劑和儀器 Olympus BH-2型熒光多功能顯微鏡,ANA復(fù)合抗原片和抗可溶性抽提抗原抗體(ENA)的檢測試劑為德國歐蒙公司提供,抗雙鏈DNA檢測試劑為福建蘭波生物工程公司提供。
1.3 應(yīng)用免疫斑點法檢測ENA(標(biāo)本1∶100稀釋) 檢測針對平滑肌抗原(SM),U1核糖核蛋白抗原(RNP),干燥綜合征(SSA,SSB)的RO、LA抗原,硬皮病70000抗原(SCL-70)和多發(fā)性肌炎抗原(JO-1)的抗體。按操作說明書進行,免疫金斑點滲濾法檢測抗雙鏈DNA,按操作說明書進行。
1.4 IIF法檢測ANA(標(biāo)本1∶100稀釋) 方法:(1)用Hep-2型細胞/靈長類肝組織復(fù)合片作為抗原片,(2)用HEP-2型細胞作為抗原片(萬孚公司提供),(3)用鼠肝勻漿片作為抗原片(自制)。采取間接免疫熒光法檢測。以出現(xiàn)特異性熒光為ANA結(jié)果陽性,反之為ANA結(jié)果陰性;陽性結(jié)果標(biāo)本同時進行ENA、抗雙鏈DNA的檢測,進行特異性自身抗體檢測。
2 結(jié)果
95例血清標(biāo)本ANA檢出情況見表1。
表1 95例血清標(biāo)本ANA檢出情況(略)
3 討論
3.1 間接免疫熒光法(IIF) 此法是檢測細胞內(nèi)抗原自身抗體的“金標(biāo)準(zhǔn)”,檢測用的抗原片一般為組織培養(yǎng)細胞、器官冰凍切片、鼠肝勻漿片等,現(xiàn)在大部分已被Hep-2型細胞代替,然而還有非常少的一部分ANA,有時不能用Hep-2型細胞檢測到,但卻能用肝組織和其他器官的組織切片檢測到 [1] ,因此,對ANA的正確檢測必須使用Hep-2細胞/靈長類肝組織復(fù)合片聯(lián)合測定,從表1中可知,聯(lián)合檢測提高了ANA的陽性檢測率。
3.2 聯(lián)合片的運用有利于對陰性結(jié)果的判斷 在實際檢測中,陰性結(jié)果Hep-2型細胞有時會出現(xiàn)綠色微弱熒光,此時,肝組織片不發(fā)熒光,只會出現(xiàn)非特異性的雜光。有報道,Hep-2型細胞法檢測ANA敏感性高,但特異性低于肝組織切片法 [2] 。在陽性結(jié)果的最終滴度檢測中肝組織片要先于Hep-2型細胞不出現(xiàn)熒光。因此,聯(lián)合片的運用更加有利于最終滴度及陰性結(jié)果判斷。
3.3 聯(lián)合片的運用有利于將某些自身抗體預(yù)先區(qū)分 [1] 在實際檢測中抗SM、抗U1-NRNP、抗雙鏈DNA等的熒光模式,在Hep-2型細胞和肝組織上有相同的熒光強度;而抗SS-A、抗SS-B等的熒光模式,在Hep-2型細胞上的熒光強度強于肝組織的強度,雖然最終的區(qū)分需要進一步檢測,但兩種不同基質(zhì)的聯(lián)合使用顯示出的熒光模式對下一步的檢測提供了有利選擇。
參考文獻
1 馬東來,張少靜.自身抗體及其免疫熒光模式.北京:科學(xué)技術(shù)出版社,2001,37-38.
2 劉海青.不同抗原底物檢測抗核抗體的結(jié)果比較.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2001,16(1):31-32.
|