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國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片的人體藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度
國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片的人體藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度 摘 要 目的：研究國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片的人體藥代動(dòng)力學(xué)和相對(duì)生物利用度。方法：選擇8名男性健康志愿者，采用反相高效液相色譜法，以紫外229 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)定了單劑量(10 mg)口服國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片和進(jìn)口鹽酸西替利嗪片在人體內(nèi)的西替利嗪濃度。結(jié)果：鹽酸西替利嗪的體內(nèi)動(dòng)態(tài)過(guò)程呈一級(jí)吸收的二房室開(kāi)放模型，國(guó)產(chǎn)片和進(jìn)口片的cmax分別為（316.71±39.66）和（314.80±31.79） ng/ml，tmax分別為（0.72±0.09 ）和（0.72±0.09） h，t1/2β分別為（10.71±3.06）和（9.95±2.41） h，AUC0～∞分別為（2 728.52±356.06）和（2 753.01±360.33） ng*h/ml。結(jié)論：國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片劑的相對(duì)生物利用度為（99.50±8.89）％；選擇cmax和AUC0～∞進(jìn)行三因素方差分析與雙單側(cè) t檢驗(yàn)，結(jié)果表明國(guó)產(chǎn)片和進(jìn)口片兩種制劑具有生物等效性。
關(guān)鍵詞：鹽酸西替利嗪；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度
西替利嗪(cetirizine)是第一代抗組胺藥物羥嗪的活性羧酸衍生物，分子結(jié)構(gòu)中的兩性離子特征使其無(wú)明顯的中樞抑制作用，臨床主要用于防治過(guò)敏性鼻炎、慢性特發(fā)性蕁麻疹、過(guò)敏性哮喘和特異性皮炎等疾病［1,2］。目前，有關(guān)鹽酸西替利嗪臨床藥代動(dòng)力學(xué)資料，國(guó)外學(xué)者已進(jìn)行了眾多的研究，涉及新生兒、幼兒、兒童、青年、老年及一些臨床病例等不同群體［3～7］。國(guó)內(nèi)江蘇連云港制藥廠首先研制了鹽酸西替利嗪片，為了評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度，本研究建立了血漿中西替利嗪的反相離子對(duì)高效液相色譜（RP-IP-HPLC）測(cè)定新方法, 并對(duì)國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片(CET)和進(jìn)口鹽酸西替利嗪片(Zyrtec，仙特敏，ZYR)進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)和相對(duì)生物利用度研究，以三因素方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)兩種制劑的生物等效性，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1 材料和方法
1.1 儀器與試藥 Waters高效液相色譜儀：Waters 510泵，Waters 486紫外檢測(cè)器，Maxima 820色譜工作站。Rheodyne 7125型六通進(jìn)樣閥，配以50 μl定量管。鹽酸西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品與CET片(規(guī)格10 mg/片,批號(hào)960520)均由江蘇連云港制藥廠提供；ZYR包衣片(規(guī)格10 mg/片,批號(hào)96A26/A)由比利時(shí)UCB公司生產(chǎn)。乙腈、磷酸、磷酸二氫鈉、枸櫞酸鈉、乙酸乙酯、三乙胺、十二烷基硫酸鈉（SDS）等實(shí)驗(yàn)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，水為重蒸餾水�！ �
1.2 色譜分離條件 分析柱為Waters Nava-Pak C18(150 mm×3.9 mm ID,4 μm)色譜柱；流動(dòng)相為乙腈∶磷酸二氫鈉(0.02 mol/L)∶三乙胺(50∶50∶0.15, pH 3.15)，內(nèi)含SDS 0.007 mol/L；流速 1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng) 229 nm；柱溫25℃。
1.3 血漿樣品預(yù)處理 精密吸取血漿樣品0.5 ml，置于10 ml具塞離心管中，加入pH 5.5枸櫞酸鈉緩沖液0.5 ml和乙酸乙酯5 ml，渦旋振蕩 2 min，3 500 r/min離心5 min。分取乙酸乙酯層4 ml，置于另一10 ml具塞離心管中，加1.7％磷酸溶液100 μl反提，3 500 r/min離心5 min后，吸取磷酸溶液50 μl進(jìn)樣分析。
1.4 體內(nèi)分析方法學(xué)評(píng)價(jià) 取健康人空白血漿共6份，精密添加鹽酸西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品一定量，配制成10.0，25.0，50.0，100.0，200.0，400.0 ng/ml的鹽酸西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品系列。按血漿樣品預(yù)處理步驟和RP-HPLC測(cè)定方法進(jìn)行操作，以測(cè)得的血漿中西替利嗪峰高（Y）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的濃度(c)為橫坐標(biāo)，其回歸方程為：Y= 89.28 + 18.53 c， r=0.999 8（n=5）。以信噪比S/N>2計(jì)，血漿樣品中西替利嗪最低檢測(cè)濃度為2.5 ng/ml，最低檢測(cè)限為 0.5 ng。選擇25.0，100.0和400.0 ng/ml 低、中、高3種不同濃度的鹽酸西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品以考察體內(nèi)分析方法的回收率和精密度，結(jié)果鹽酸西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品萃取回收率>70％ ,方法回收率>95％；日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）<4.6％(n=5)，日間RSD<7.2％(n=5)。
1.5 研究對(duì)象與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 男性健康志愿者8名，平均年齡（22.88±0.83）歲， 平均體質(zhì)量（68.19±4.96） kg。所有志愿者經(jīng)肝腎功能、血尿常規(guī)及心電圖檢查均正常，且精神良好；受試前1個(gè)月內(nèi)未服用任何藥物，禁忌煙酒。健康志愿者明了本試驗(yàn)的目的與要求，均簽署知情同意書(shū)，并上報(bào)長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)備案。
采用隨機(jī)交叉試驗(yàn)，將8名健康志愿者隨機(jī)分為兩組，受試前隔夜禁食12 h，次日早晨空腹分別口服10 mg CET片和10 mg ZYR片，200 ml溫開(kāi)水送服。于服藥后0.25，0.5，0.75，1.0，2.0，4.0，6.0，10.0，16.0，24.0，36.0 h從其左 (右) 肘靜脈采血約 3 ml，血樣置于肝素抗凝管中,2 500 r/min離心5 min后分取血漿，置-20℃冰箱保存待測(cè)。兩次試驗(yàn)的間隔周期為2周。
1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 西替利嗪血藥濃度-時(shí)間曲線下面積（AUC）值由梯形法計(jì)算，其中AUC0～36由體內(nèi)血漿樣品中西替利嗪實(shí)測(cè)值計(jì)算，AUC36～∞根據(jù)消除相尾部 lnc-t直線斜率k值和36 h點(diǎn)西替利嗪血漿濃度計(jì)算。以ZYR片的AUC0～∞為參照，求算CET片的相對(duì)生物利用度。選擇NDST 5.0統(tǒng)計(jì)分析程序，對(duì)主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)cmax 和AUC0～∞進(jìn)行三因素方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)（顯著性水平α=0.05）。 2 結(jié) 果
2.1 色譜行為與典型譜圖 在本研究建立的血漿樣品色譜分離條件下，西替利嗪的保留時(shí)間約為5.3 min， 相應(yīng)的理論塔板數(shù)每米約6 400。 圖1為空白血漿和實(shí)測(cè)血漿樣品的典型色譜分離譜圖，顯然西替利嗪與血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)之間達(dá)到了良好的分離，其色譜峰位處沒(méi)有其他雜質(zhì)的干擾。
圖1 血漿樣品中西替利嗪的RP-HPLC分離譜圖
Fig 1 RP-HPLC chromatograms after a single oral
dose of 10 mg cetirizine hydrochloride tablet
A：Blank plasma；B：Volunteer plasma
2.2 人體藥代動(dòng)力學(xué) 8名健康志愿者單劑量口服10 mg CET片和10 mg ZYR片后體內(nèi)西替利嗪平均血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示鹽酸西替利嗪在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程呈一級(jí)吸收的二房室開(kāi)放模型，其中CET片和ZYR片的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。
圖2 單劑量口服10 mg鹽酸西替利嗪片
后體內(nèi)平均血藥濃度-時(shí)間曲線
Fig 2 Mean plasma concentration-time curve after
a single oral dose of 10 mg cetirizine hydrochloride tablet
●: CET tablet；○: ZYR tablet；（n=8）
表1 單劑量口服CET片與ZYR片后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)
Tab 1 Pharmacokinetic parameters after a single
oral dose of CET tablet and ZYR tablet （n=8,±s）
Parameter CET tablet ZYR tablet
Ka (t/h-1) 4.18±3.10 5.26±3.58
K10 (t/h-1) 0.18±0.06 0.17±0.05
t1/2ka (t/h) 0.27±0.18 0.18±0.09
t1/2α (t/h) 1.10±1.10 1.00±1.09
t1/2β (t/h) 10.71±3.06 9.95±2.41
tmax (t/h) 0.72±0.09 0.72±0.09
cmax (ρB/ng*ml-1) 316.71±39.66 314.80±31.79
AUC0～∞
(A/ng*h*ml-1) 2 728.52±356.06 2 753.01±360.33
2.3 相對(duì)生物利用度與生物等效性評(píng)價(jià) 8名健康志愿者單劑量口服10 mg CET片和10 mg ZYR片后體內(nèi)西替利嗪AUC0～∞及相對(duì)生物利用度比較結(jié)果列于表2，其中平均相對(duì)生物利用度為（99.50±8.89）％。應(yīng)用新藥統(tǒng)計(jì)程序 NDST 5.0 對(duì)口服CET片和ZYR片后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)lncmax 和lnAUC0～∞進(jìn)行三因素方差分析, 結(jié)果表明試驗(yàn)制劑間及交叉周期間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，僅健康個(gè)體間存在差異；進(jìn)一步進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)，結(jié)果判定CET片和ZYR片具有生物等效性。
表2 單劑量口服CET片與ZYR片10 mg后的AUC
比較與相對(duì)生物利用度計(jì)算
Tab 2 AUC comparison and relative bioavailability after
a single oral dose of 10 mg CET tablet and ZYR tablet
No. CET tablet ZYR tablet Relativebioavail No. Period AUC0～∞ Period AUC0～∞ -ability(%)
(A/ng*h*ml-1) (A/ng*h*ml-1)
A 1 2 801.65 2 2 603.01 107.63
B 1 2 602.00 2 3 021.99 86.10
C 1 2 625.30 2 2 521.28 104.13
D 1 2 569.60 2 2 787.53 92.18
E 2 3 561.62 1 3 493.68 1 01.94
F 2 2 569.92 1 2 732.12 9 4.06
G 2 2 396.47 1 2 478.54 96.69
H 2 2 701.62 1 2 385.89 113.23
± 99.50
s 8.89 3 討 論
目前，文獻(xiàn)報(bào)道鹽酸西替利嗪的體內(nèi)分析方法主要為HPLC法、氣相色譜（GC）法和高效薄層色譜法［6～8］。本實(shí)驗(yàn)借鑒文獻(xiàn)［6］中離子對(duì)技術(shù)，以常用的SDS替代相對(duì)稀少的癸烷磺酸鈉作為離子對(duì)試劑,同時(shí)考慮到西替利嗪分子結(jié)構(gòu)中叔氨基團(tuán)易與固定相表面殘留的硅醇基產(chǎn)生離子交換作用，選擇三乙胺競(jìng)爭(zhēng)抑制或掩蔽游離硅醇基的活性，有利于堿性藥物峰形對(duì)稱并縮短保留時(shí)間。血漿樣品預(yù)處理采用乙酸乙酯正提和稀磷酸反提兩步操作,在保證萃取回收率的前提下,使體內(nèi)樣品提取物色譜分離干擾減少,并在強(qiáng)洗脫流動(dòng)相條件下使血漿樣品中微量西替利嗪組分快速出峰,極大地提高了檢測(cè)靈敏度。本實(shí)驗(yàn)所需血樣僅為0.5 ml,但最低檢測(cè)濃度與文獻(xiàn)［6］相當(dāng),且為GC體內(nèi)分析方法［7］最低檢測(cè)濃度的1/5。
Desager等［4］曾對(duì)成人單劑量口服20 mg西替利嗪水溶液和兒童單劑量口服5 mg西替利嗪水溶液后的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行了研究，其中成人體內(nèi)西替利嗪tmax為（0.62±0.22） h，t1/2β為（8.6±2.1） h；而兒童體內(nèi)西替利嗪tmax相對(duì)延長(zhǎng)，可達(dá)（1.07±0.45）h (P<0.01),t1/2β顯著縮短，僅為（4.91±0.60） h (P<0.001)。本文研究結(jié)果表明，8名男性健康志愿者單劑量口服10 mg鹽酸西替利嗪片后的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)呈現(xiàn)一級(jí)吸收的二房室開(kāi)放模型，tmax和t1/2β與文獻(xiàn)報(bào)道的成人鹽酸西替利嗪體內(nèi)過(guò)程基本一致［4，5］。CET片和ZYR片的主 國(guó)產(chǎn)鹽酸西替利嗪片的人體藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)cmax和AUC0～∞經(jīng)三因素方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)均無(wú)顯著性差異，且CET片的相對(duì)生物利用度為（99.50±8.89）％。■
作者簡(jiǎn)介：范國(guó)榮（1966-），男（漢族），博士，主管藥師范國(guó)榮（第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，上海 200003） 參考文獻(xiàn) ［1］ Campoli-Richards DM,Buckley MMT,Fitton A. Cetirizine: a review of its pharmacological properties
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