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杜仲降壓片的質量標準的研究
【摘要】 目的:探討并制定杜仲降壓片的質量標準。方法:采用TCL法對杜仲降壓片中的益母草、鉤藤進行定性鑒別,采用HPLC法測定黃芩苷的含量。結果: 益母草、鉤藤薄層色譜圖斑點清晰,重現(xiàn)性好,無干擾。黃芩苷在0.25 μg~2 μg之間呈良好的線性關系(r=0.999 9)。結論:所建立的方法準確可靠,可用于該制劑的質量控制。
【關鍵詞】 杜仲降壓片;TLC;HPLC;質量標準
Abstract Objective:To establish quality control standards for Duzhong Jiangya tablet.Methods:Herba Leonuri and Ramulus Uncariae Cum Uncis in preparation were identified by TLC,the content of paeoniflorin was determined by HPLC.Results:The chromatographic spots of samples showed the same colors with those of control article.The calibration curve showed a good linear relationship in the range of 0.25 μg~2 μg for baicalin,r=0.999 9.Conclusion:Two methods are accurate,reliable with good feasibility and repeatability,can be used to control the quality of this preparation effectively.
Key words Duzhong Jiangya tablet,TLC,HPLC,quality control standards 杜仲降壓片由杜仲、益母草、夏枯草、黃芩、鉤藤5味中藥組成,具有補腎、平肝、清熱之功效,用于腎虛肝旺之高血壓癥。本實驗對該制劑中的益母草、鉤藤進行了薄層鑒別,并采用HPLC法測定該制劑中黃芩苷的含量,現(xiàn)將結果報道如下。
1 實驗材料
1.1 藥品與試劑
實驗用藥材購自醫(yī)藥公司,經檢驗符合藥典規(guī)定;杜仲降壓片由貴州百花醫(yī)藥集團有限公司生產,批號060516;鉤藤對照藥材(121190-200402)、鹽酸水蘇堿(110712-200306)、黃芩苷(110715-200212)對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。實驗所用試劑除另有規(guī)定外,均為分析純,色譜用試劑乙腈為色譜純,水為重蒸水。
1.2 實驗儀器
日立-2130高壓恒流輸液泵、日立-2400紫外可變波長檢測器由日立分析儀器有限公司生產,N2000色譜數(shù)據(jù)處理工作站由浙江大學智達信息工程有限公司生產。
2 方法與結果
2.1 益母草薄層色譜鑒別
益母草中含有鹽酸水蘇堿,參照《中國藥典》2005年版一部 [1]益母草膏項下薄層鑒別方法:取本品40片,去包衣,研細,稱取10 g,加水20 mL,攪拌,加稀鹽酸調節(jié)pH值為1~2,離心,取上清液加在強酸性陽離子交換樹脂柱上,以水洗至流出液近無色,棄去水液,再以2 mol/L 氨溶液40 mL洗脫,收集洗脫液,水浴蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。按處方比例及制法制備缺益母草的陰性對照品,按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照溶液。另取鹽酸水蘇堿對照品適量,加甲醇制成1 mg/mL的溶液,作為對照品溶液。按照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法,吸取上述溶液各10 μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以正丁醇-鹽酸-醋酸乙脂(8∶3∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試劑。結果供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照色譜在相應位置上無斑點,即陰性無干擾。結果見圖1。
2.2 鉤藤薄層色譜鑒別
鉤藤主要成分為生物堿,我們根據(jù)生物堿的性質,參照文獻[3]的方法來制備樣品溶液和陰性對照溶液,與鉤藤對照藥材對照。參照文獻[4]方法進行展開和顯色。取本品20片,去包衣,研細,稱取6 g,加80%乙醇100 mL,置水浴上加熱回流30 min,濾過;殘留物加1%鹽酸5 mL使溶解,濾過,濾液用氨水調pH至9,用氯仿萃取2次,每次10 mL,氯仿液濃縮至干,加0.5 mL乙醇溶解作為供試品溶液。按處方比例及制法制備缺鉤藤的陰性樣品,按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照溶液。另取鉤藤對照藥材2 g,同法制成對照藥材溶液。參照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法,吸取上述3種溶液各10 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-氨水(20∶1∶1)下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試劑。結果供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的兩個橙紅色斑點,陰性對照色譜在相應的位置上無斑點。結果見圖2。
2.3 黃芩苷的含量測定 [5]
2.3.1 色譜分析條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)為流動相,流速1.0 mL/min,檢測波長為315 nm。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2 000。
2.3.2 供試品溶液的制備與測定 取本品10片,去包衣,研碎,混勻,取約0.25 g,精密稱定,置于50 mL具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇30 mL,密閉,超聲處理30 min,搖勻,濾過,濾液置50 mL容量瓶中,藥渣及濾器用70%乙醇適量洗滌,洗液并入同一容量瓶中,加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得。HPLC測定結果見圖3。
2.3.3 對照品溶液的制備與測定 精密稱取減壓干燥4 h的黃芩苷對照品10 mg,置100 mL容量瓶中,加甲醇使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,即得(每毫升含黃芩苷0.1 mg)。HPLC測定結果見圖4。
2.3.4 陰性對照溶液制備與測定 按處方比例及制法制備缺黃芩的陰性對照品,按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照溶液。經進樣檢測陰性對照圖譜中在與黃芩苷峰相同保留時間處未見干擾。結果見圖5。
2.3.5 標準曲線的制備 精密稱取黃芩苷對照品,制成濃度為0.1 mg/mL的樣品,分別進樣2.5 μL、5.0 μL、10 μL、15 μL、20 μL測定峰面積,以峰面積積分值為縱坐標,黃芩苷進樣量為橫坐標繪制標準曲線,得回歸方程Y=185 755X+23 136,r=0.999 9。表明黃芩苷在0.25 μg~2 μg之間呈良好的線性關系。
2.3.6 精密度測定試驗 取同一對照品溶液10 L,注入高效液相色譜儀,重復進樣5次,測定黃芩苷峰面積,并計算相對標準偏差RSD為1.23%。
2.3.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,每隔2 h進樣一次,共進樣5次,按上述色譜條件測定黃芩苷峰面積,并計算黃芩苷峰面積積分值的相對標準偏差RSD為0.8%(n=5),表明供試品溶液在8 h內基本穩(wěn)定。
2.3.8 重現(xiàn)性實驗 取同一批號(批號:060516)供試品,按供試品溶液制備方法制備5份供試液,分別測定黃芩苷峰面積,并計算黃芩苷含量和相對標準偏差。結果黃芩苷平均含量為5.78 mg/片,RSD為1.88%。
2.3.9 加樣回收率試驗 取同一批號已知含量供試品(批號:060516;黃芩苷含量5.78 mg/片)20片,去包衣,研碎,混勻,取0.125 g,精密稱定,共取5份,均加入黃芩苷對照品2.4 mg,按照供試品溶液制備方法制備供試液,進樣量10 μL,測定黃芩苷峰面積,計算黃芩苷含量,并計算加樣回收率,結果見表1。
2.3.10 樣品含量測定 分別吸取對照品溶液及供試品溶液各10 μL注入色譜儀,測得峰面積,以外標法計算黃芩苷含量。結果見表2。
3 討 論
杜仲降壓片的君藥為杜仲,主含木脂素、環(huán)烯醚萜類及杜仲膠等成分,降壓成分為松脂醇-二葡萄糖苷,但中國藥品生物制品檢定所未能提供相應對照品,故無法進行定量測定。黃芩為方中臣藥,采用HPLC法測定制劑中黃芩苷含量,方法簡單,重復性好,可以作為含量測定指標。
【參考文獻】
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[4]張榕,張春蘭,方平飛,等.天麻鉤藤顆粒的薄層色譜研究[J].華西藥學雜志,2001,16(5):384-386.
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