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淺議牛耳楓中蘆丁的含量測定
【摘要】 目的 建立牛耳楓的質量鑒測指標。方法 采用薄層色譜鑒別,高效液相色譜法測定牛耳楓中蘆丁的含量,高效液相色譜條件 Hypersil柱(4.6 mm×250 mm,10 μl),流動相:甲醇-0.4%磷酸溶液(35∶65)。結果 高效液相法測定牛耳楓中蘆丁,方法重現(xiàn)性好,準確可靠。結論 該方法可用于牛耳楓中蘆丁的含量測定。
【關鍵詞】 牛耳楓;蘆丁;高效液相色譜;薄層色譜
1 儀器與試藥
1.1 儀器 高效液相色譜儀:HP1100DAD檢測器,十萬分之一電子天平。
1.2 試藥 蘆丁對照品:中國藥品生物制品檢定所,批號080-9303,牛耳楓:購于廣州市藥材公司,甲醇(色譜純):天津四友,硅膠G:青島海洋化工廠。2 方法與結果
2.1 色譜條件 色譜柱:依利特Hypersil C18(4.6×250 mm,10 μl),流動相為甲醇-0.4%磷酸(35∶65),流速為1 ml/min,檢測波長為360 nm。
2.2 對照品溶液的制備 精密稱蘆丁對照品適量,置容量瓶中,加甲醇制成每1 ml含25 μg的溶液,即得。供試品溶液的制備:取牛耳楓藥材粉末0.5 g,精密稱定,加入乙醚50 ml,超聲15 min,濾過,去棄乙醚液,藥渣待揮干乙醚,藥渣精密加甲醇50 ml,稱定重量,水浴回流1 h,補足減失的甲醇重量,濾過,去棄初濾液,續(xù)濾液作供試品。測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μl,注入色譜儀,測定,即得。
2.3 分離度試驗 吸取蘆丁對照品溶液、供試品溶液按上述方法測定,見圖1、2。結果:樣品中蘆丁的分離度良好。
2.4 標準曲線 取蘆丁對照品溶液(0.016704 mg/ml),分別進樣5 μl、10 μl、15 μl、20 μl,按試驗方法項下的色譜條件測定其峰面積。以蘆丁進樣量(μg)為縱坐標,色譜峰的面積為橫坐標,繪制標準曲線,結果表明,蘆丁在0.0835~0.3341 μg的范圍內,其進樣量與色譜峰面積呈良好的線性關系。回歸方程:Y=0.0007X+0.0029,相關系數(shù)r=0.9997。
2.5 穩(wěn)定性試驗 取樣品按含量測定項下的色譜條件測定其峰面積,每隔2 h測1次,連續(xù)測4次,結果:樣品在8 h內測定是穩(wěn)定的,RSD=0.82%。
2.6 精密度試驗 取對照品溶液(0.016704 mg/ml),分別等量10 μl進樣5次,按上述實驗方法項下的色譜條件測定,RSD=0.6%。
2.7 重現(xiàn)性試驗 取樣品一式5份,按含量試驗項下的條件測定,計算蘆丁積分面積,結果:RSD=2.1%。
2.8 回收率試驗 取已測定含量(0.736 mg/g)的供試品約0.25 g,精密稱定,再精密加入0.1739 mg蘆丁對照品,按上述供試品溶液的制備方法制備和測定,一式5份,其結果見表1。表1 回收率試驗結果表明:本測定方法的平均回收率為98%,基本符合要求。3 4批樣品的含量 取樣品分別按含量測定項下的方法分別測定,其結果見表2。表2 4批樣品含量
4 討論
牛耳楓中蘆丁含量測定的流動相,還考察了流動相甲醇-水(35∶65)[2]、流動相甲醇-水-乙腈-冰乙酸(30∶57.5∶10∶2.5)[3]。采用流動相甲醇-水(35∶65),蘆丁峰有少許拖尾。采用流動相甲醇-水-乙腈-冰乙酸(30∶57.5∶10∶2.5),蘆丁峰分離效果較好,但要采用4種溶劑,成本也較高,而采用甲醇-0.4%磷酸溶液(35∶65),蘆丁峰分離效果也好,且成本低、簡便。
【參考文獻】
1 黃泰康.常用中藥成份與藥理手冊.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1994,1700.
2 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊).北京:人民衛(wèi)生出版社,1988,897-898.
3 鄧富良,陳本美.高效液相色譜法測定槐米中的蘆丁含量.湖南醫(yī)科大學學報,2006,25(6):597-598
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