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探索大鼠AA對金鐵鎖總皂苷抗炎作用的反應性
探索大鼠AA對金鐵鎖總皂苷抗炎作用的反應性 【摘要】 目的 通過實驗觀察和探討金鐵鎖總皂苷(TSPT)抗炎作用及其作用機理。方法 建立佐劑性關節(jié)炎(AA)動物模型,通過觀察TSPT對AA大鼠足腫脹及炎性組織液中丙二醛(MDA)水平的影響來探討其抗炎作用及其作用機制。結(jié)果 TSPT能有效抑制AA大鼠足腫脹,降低炎性組織液中MDA的水平。結(jié)論 TSPT具有良好的抗炎作用,其作用機制與降低MDA水平有關。
【關鍵詞】 金鐵鎖總皂苷 佐劑性關節(jié)炎 MDA
【Abstract】 Objective To observe the anti-inflammation effects and possible mechanism of Total Saponins of Psammosilene tunicoids (TSPT) .Methods After establishing AA rats model, the TSPT's anti-inflammatory effects and mechanism against AA was studied through observing changes of the ankle swelling and contents of MDA in inflammatory-tissue soak of AA rats.Results TSPT could inhibit articular swelling and effectively decrease the content of MDA in inflammatory tissue soak of AA rats.Conclusion TSPT has good anti-inflammation effects and the mechanism is likely related to TSPT's down-regulation of MDA.
【Key words】 TSPT AA MDA
金鐵鎖(苗語:Jenb tieeg sox)系苗族習用藥材[1],首載于《滇南本草》,為石竹科植物金鐵鎖Psammosilene tunicoides.W.C.Wu et C.Y.Wu的干燥根。別名:獨定子、對葉七、白馬分鬃等,主要含皂苷類成分。具有散瘀定痛、止血、消癰排膿之功,用于跌打損傷,風濕痛、胃痛、創(chuàng)傷出血等的治療[2]。目前尚關于其抗AA研究的文獻報道,本文就關于金鐵鎖總皂苷抗AA作用的研究作一介紹。
1 材料與方法
1.1 材料 Freund's完全佐劑(sigma公司產(chǎn)品,由幫定生物技術公司提供),注射器(1.0ml),金鐵鎖總皂苷(貴陽中醫(yī)學院制劑教研室提取),地塞米松注射液(批號:0206101,天津金輝氨基酸有限公司提供),風濕寧注射液(批號504002,羅浮山藥業(yè)提供),TSPT(貴陽中醫(yī)學院制劑教研室提取)。
動物:70只雄性Wistar大鼠,體重:(200±30)g,清潔級二級動物(由軍事醫(yī)學科學院動物中心提供)。
1.2 實驗方法
1.2.1 分組 70只Wistar雄性大鼠,隨機分為7個組。分別為:生理鹽水組(NS)、模型組(A)、西藥陽性對照組(地塞米松注射液)(B)、中藥陽性對照組(風濕寧注射液)(C)、TSPT大(D)、中(E)、小(F)劑量組。
1.2.2 造模 除NS組外,其余各組于每只大鼠右后足跖皮內(nèi)注射Freund's完全佐劑0.1ml致炎。第1天記錄大鼠的體重和兩側(cè)腳踝關節(jié)的周長。
1.2.3 給藥 除NS組外,其余均按上述方法造模,于造模后第9天開始給藥,連續(xù)給藥12天。每隔3天,記錄各組大鼠體重,及踝關節(jié)腫脹,末次給藥(造模后第21天)1h后處死大鼠,觀察藥物對繼發(fā)性病變的影響。
2 結(jié)果
2.1 TSPT 對AA大鼠足腫脹的影響 足腫脹的測量方法:用記號筆標記腫脹踝關節(jié)周徑,每日以特制軟皮尺測量踝關節(jié)周長(軟皮尺無彈性,最小刻度為0.1cm)。實驗結(jié)果見表1。
統(tǒng)計結(jié)果分析:實驗結(jié)果表明,與生理鹽水比較,造模后第8天(藥前)各組足均明顯腫脹(P<0.01),表明造模成功。用藥約1周后,TSPT大、中劑量對足腫脹均顯示出明顯的抑制作用(P<0.01),作用強度大于中藥陽性組(風濕寧注射液),接近地塞米松組。提示:TSPT能有效抑制AA大鼠踝關節(jié)的炎癥反應。
2.2 大鼠致炎足中丙二醛(MDA)生成量的測定 動物造模分組給藥同上。鼠致炎21天后處死,在致炎側(cè)關節(jié)上方0.5cm處摘取腫脹足爪,縱向切開,放入5ml生理鹽水的試管中4 ℃浸泡過夜,離心(3000r/min)取上清液,-20℃保存待測。
試劑與儀器:MDA試劑盒(由制劑科提供)、恒溫水浴鍋、離心機(由檢驗科提供)。
測定方法及參數(shù):硫代巴比妥酸結(jié)合法,于532nm處測定,實驗操作方法嚴格按照試劑盒說明進行。
2.3 統(tǒng)計學方法 實驗結(jié)果以(x±s)表示,采用t檢驗。如表2。
表1 TSPT對AA大鼠足腫脹的影響 (n=10, x±s)
注:與NS組比較:***P<0.01;與模型組(A組)比較:★★P<0.05,★★★P<0.01;與西陽組比較(B):△△P<0.05,△△△P<0.01。與中陽(C)組比較:※※P<0.05,※※※P<0.01
表2 TSPT對AA大鼠炎性組織液中MDA的影響 (n=6,x±s)
注:與NS組比較:**P<0.05;***P<0.01; 與模型組(A)比較:★★P<0.05,★★★P<0.01; 與西陽組比較(B):△△P<0.05,△△△P<0.01;與中陽組比較:※※P<0.05
圖1 TSPT對MDA水平的影響圖
由圖表統(tǒng)計分析可知:與NS組比較,模型組炎性組織液中,MDA的含量顯著升高(P<0.01),這顯示出AA大鼠出現(xiàn)嚴重的炎性反應。經(jīng)治療后,與模型組比較,各個給藥組AA大鼠炎性組織液中MDA含量均有不同程度的降低,B(西陽組)、D(TSPT大劑量組)表現(xiàn)出差異有非常顯著性(P<0.01)。
3 討論
MDA通過酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,自由基可引起脂質(zhì)過氧化,影響一些基因的表達,在炎癥和免疫過程中起著中介作用[3]。因此自由基在生物體系中的作用正受到廣泛重視。在正常情況下,機體內(nèi)僅產(chǎn)生少量氧自由基,其產(chǎn)生、利用和清除保持一種動態(tài)平衡。一旦由于某種原因造成體內(nèi)自由基的堆積,便會損傷組織細胞,導致各種病理變化。
AA大鼠炎癥反應中,模型對照組炎性組織液中MDA含量顯著升高與AA大鼠足腫脹呈正相關,表明致炎因子使機體產(chǎn)生過量的氧自由基。這些活性氧可直接作用于一些細胞包括免疫細胞,與其脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生反應,引起脂質(zhì)過氧化,使MDA增多,造成細胞毒性和功能受損。MDA的增多會造成自由基連鎖反應加強,使炎癥加重或發(fā)展。經(jīng)TSPT治療后,大鼠炎性組織中MDA的含量降低,表明TSPT能抑制或阻斷炎癥時氧自由基的過量產(chǎn)生與釋放,減輕氧化應激反應與脂質(zhì)過氧化,使其終產(chǎn)物MDA降低,并接近正常組水平,因而減少了對細胞的損傷,糾正體內(nèi)氧自由基代謝失衡或紊亂的作用,調(diào)整機體內(nèi)環(huán)境,起到消炎、抗氧化和細胞保護作用,促進了炎癥反應的消退。TSPT抗炎免疫的作用機理是多方面的,本實驗結(jié)果提示,TSPT對AA大鼠炎癥時氧自由基代謝的調(diào)整作用,可能是其中一個重要環(huán)節(jié),對AA大鼠的抗關節(jié)炎作用可能與其降低脂質(zhì)過氧化,恢復抗氧化酶活性和腹腔Mφ分泌功能等有關。
【參考文獻】
1 包駿,冉懋雄. 貴州苗族醫(yī)藥研究與開發(fā). 貴陽:貴州科技出版社,1999,174.
2 中華本草編委會. 中華本草. 第二卷.上海:上�？茖W技術出版社, 1999,782.
3 莫簡.關于自由基在生物體系中作用的幾點看法.第四軍醫(yī)大學學報,1997,18(2):199.
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