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初探五味子提取物體外抑菌作用
【摘要】 [目的]研究五味子提取物的抑菌活性,為其合理開發(fā)提供參考。[方法]以大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌為供試菌種,采用濾紙片法和平板二倍稀釋法研究了五味子70%乙醇提取液的抑菌作用。[結果]五味子提取物對4種供試菌都有明顯的抑制作用。濾紙片法的MIC,金黃色葡萄球菌為62.5mg/ml,大腸埃希氏菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg/ml;二倍稀釋法的結果類似,除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外,其余3種菌均為25mg/ml。另外,五味子提取物經短時間的高溫處理,仍具有較強的抑菌作用。[結論]五味子乙醇提取物具有明顯的抑菌作用,且其抑菌成分是熱穩(wěn)定的。
【關鍵詞】 五味子 提取物 抑菌作用
五味子[Schisandra chinensis(Turcz.)Baill]別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等,為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質藤本,以野生為主,為常用中藥材。主要以果實入藥,因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名,有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能�？梢灾委熆人�、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經衰弱等癥,也是很好的果酒和飲料的原料[1],具有極高的藥用價值和營養(yǎng)價值,是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品,其果實在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料[2,3]。本實驗采用濾紙片法和二倍稀釋法,研究了五味子提取物對4種常見污染菌的抑制作用,為其進一步開發(fā)利用提供依據。
1 資料與方法
1.1 菌種與培養(yǎng)基 試驗菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌,由浙江省臺州醫(yī)院微生物實驗室友情贈送。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基按文獻[4]自制,PH為6.0(用PBS配制[5])。
1.2 五味子提取物的制備 五味子飲片購自臨海市醫(yī)藥有限公司,經70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75%乙醇在超聲波清洗器中提取,反復多次,直至浸出液色淡。將浸出液濃縮,并定容到10ml,即1ml提取液為1g五味子的提取物[6]。提取液過0.22μm濾膜除菌,4℃貯存?zhèn)溆谩?br> 1.3 抑菌試驗
1.3.1 抑菌效力的測定 將供試菌從斜面轉接到5ml液體培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)24h,吸取50μl到5ml液體培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)6h后取100μl菌液均勻涂布到平板上;再貼上濾紙圓片(φ6mm,提取液浸24h后風干),每皿4片,重復3次。37℃倒置培養(yǎng)24h后測定抑菌圈大小,用無菌水作空白對照,確定抑菌效果。
1.3.2 最低抑菌濃度(MIC)的測定 采用二倍稀釋法[7]測定提取物對供試菌的MIC。取7支試管,第1支加入10ml提取液,其余6支各加入5ml無菌水,從第1支吸取5ml提取液移至第2支,混勻后,再吸取5ml至第3支,以此類推,最后1支試管取出5ml棄去,每一試管的濃度分別為1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養(yǎng)基混勻,制成提取物的濃度分別為200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml(w/v)的平板,接種菌液后倒置培養(yǎng)24h觀察,以沒有供試菌生長的最低濃度為提取物的MIC。
1.3.3 熱穩(wěn)定性試驗 將五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃濕熱條件下[8]熱處理20min,再制成濃度為500mg/ml的提取液浸泡濾紙片,稍風干后貼在涂有菌液的平板中,測定其抑菌效果。
2 結果與分析
2.1 提取物濃度對抑菌效力的影響 濾紙片法測定結果(見表1)顯示,五味子提取物對4種供試菌的生長均有很強的抑制作用,其中對綠膿桿菌的抑制作用最強,肺炎克雷伯氏菌其次,大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最弱。
表1 五味子提取物的濃度對抑菌效率的影響(略)
2.2 不同菌的MIC 提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外,其余3種菌均為25mg/ml(與濾紙片法基本一致)。
表2 五味子提取物的MIC(mg/ml)(略)
“-”表示無菌生長,“+”表示細菌生長
2.3 提取物的熱穩(wěn)定性試驗 提取物經3種溫度的熱處理20min后,仍具有較強的抑菌效力,其抑菌圈直徑與未經高溫處理的樣品接近,其中只有對綠膿桿菌抑制作用,經100℃處理和濕熱滅菌后有顯著下降,對金黃色葡萄球菌的抑制作用,經濕熱滅菌后有顯著降低;而對大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用,3種處理與對照均無顯著差異(見表3)。說明五味子的抑菌成分具有一定的熱穩(wěn)定性。
表3 熱處理對五味子提取物抑菌效力的影響(略)
不同字母表示P<0.05水平顯著,ns為不顯著
3 結論
經反復實驗,結果表明五味子提取物的濃度在31.3~1000mg/ml范圍內,對4種供試菌的抑制效應依次為:綠膿桿菌>肺炎克雷伯氏菌>大腸桿菌>金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴散法結果顯示,除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外,其余3種供試菌MIC均為31.3mg/ml;采用二倍稀釋法測得的MIC也顯示類似的結果,金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml,另3種菌的MIC均為25mg/ml。另外,五味子提取物經短時高溫處理后,其活性成分不變,仍保持較強的抑菌效果。
【參考文獻】
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[2] 王森.五味子研究概況及其發(fā)展前景[J].經濟林研究,2003,(4):8587.
[3] 王森.栽培五味子有前途[J].農家參謀,2002,(1):35.
[4] 黃秀梨.微生物實驗指導[M].北京:高等教育出版社,1997:35115.
[5] 張志良,瞿偉菁.植物生理學實驗指導[M].北京:高等教育出版社,2004:307.
[6] 李鈞敏,虞優(yōu)優(yōu),金則新.大血藤葉片提取物抑菌作用的初步研究[J].浙江中醫(yī)學院學報,2004,28(1):5557.
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