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正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細胞凋亡及增殖基因表達的研究
正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細胞凋亡及增殖基因表達的研究 [論文摘要] 目的：探討正常妊娠及妊高征（ PIH）孕婦胎盤組織bcl－2、bax及 ki67基因的表達及其相互關系。方法：采用免疫組化方法測定正常早、中、晚期妊娠30例及輕、中、重度 PIH36例的胎盤組織 bcl－2、bax及ki67的表達。結果：（l）bcl－2表達主要定位在絨毛的合體滋養(yǎng)層細胞（S－cells），而 bax在 S－cells和細胞滋養(yǎng)層細胞（C－ceIIs）均呈陽性，在絨毛間質中baX也呈陽性表達，但強度低于滋養(yǎng)層細胞。ki67定位于C－ceIIs；（2）bcl－2在晚期妊娠組的陽性率低于早、中期妊娠組（P＜0．05）。ki67在正常早、中、晚期妊娠組，對照組與 PIH組，輕、中、重度 PIH組之間均有顯著性差異（ P＜ 0.01）；（3）bcl－2和 bax表達及與 ki67的表達無相關性（P＞ 0．05）。結論：bcl－ 2及 bax在高水平上達到平衡，在胎盤組織中并不起介導細胞凋亡的主導作用，而且二者的表達不影響細胞的增殖。 [關鍵詞] 胎盤 細胞凋亡 bcl-2 bax ki67[論文] 人類胎盤不僅在胎兒—胎盤—母體的關系上起中心軸的作用，而且功能上失調會導致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進展，絨毛和滋養(yǎng)層不斷成熟和分化，已發(fā)現許多物質包括原癌基因產物，在胎盤有生理性的表達。胎兒的發(fā)展特征是細胞群增殖和誘導或抑制細胞凋亡成熟起來的，因此，胎盤在妊娠期間也經歷著相似的變化。我們通過測定胎盤組織中細胞凋亡調控基因bcl-2、bax及細胞增殖基因ki67，進一步探討了妊娠高血壓綜合征（PIH）的病理性變化。1 資料與方法1.1 臨床資料 隨機選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)院及長春市婦產醫(yī)院婦科門診及產科病房的孕產婦66例。（1）妊高征組36例，平均26.14±3.42歲,平均孕37.44±3.9周,輕度9例,中度10例,重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.25±3.80歲，平均孕9.03±1.11周；孕中期5例，平均26.55±3.93歲，平均孕24.05±3.63周；孕晚期（對照組）15例，平均27.76±3.38歲，平均孕39.82±1.32周。1.2 標本采集及處理 孕早期是行人工流產術者，孕中期是來自無妊娠合并癥、并發(fā)癥，要求終止妊娠而行水囊引產者，孕晚期為單胎足月初產婦，無妊娠合并癥、并發(fā)癥、以自然分娩及擇期剖宮產手主結束分娩，其剖宮產指標主要是頭盆不稱及社會因素。妊高征組孕婦是無慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。早孕絨毛組織不需進一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面（避開鈣化、機化灶）隨機取3個不同區(qū)域約2cm×2cm×2cm胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。1.3 方法 用免疫組化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及SP試劑盒均購自福州邁新生物工程公司。每次染色均設陽性和陰性對照。1.4 結果判定 由2名醫(yī)師獨立觀察切片中10個高倍視野。（1）陽性標準：SP法顯示bcl-2及bax定位于胞漿和胞膜內，反應產物為棕黃色。根據顯色程度分為4級：（-）為無著色，（+）為淡黃色，（++）為棕黃色，（+++）為棕褐色;（2）SP法顯示ki67以細胞核呈清晰棕褐色為陽性，按陽性細胞占C-cells的比例分為：陽性細胞數＜10%為（-）；10%-20%為（+）；20%-30%為（++）；＞30%為（+++）。1.5 統(tǒng)計學分析Fisher精確概率檢驗法，兩組計數資料用等級相關分析。2 結果2. 1 正常妊娠期胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2表達主要定位在絨毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈陽性，同時在絨毛間質中bax也呈陽性表達，但強度低于滋養(yǎng)層細胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＞0.05）；ki67在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＜0.01）。早、中、晚期妊娠組bcl-2的表達強度與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。2 .2 妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在對照組與PIH兩組間差異無顯著性（P＞0.05），bax兩組差異無顯著性（P＞0.05），對照組ki67的陽性率明顯低于PIH組（P＜0.01）。bcl-2與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。2.3 妊高征胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在輕、中、重度PIH3組間差異無顯著性（P＞0.05），bax在3組間差異也無顯著性（P＞0.05），而ki67在輕度PIH組的陽性率明顯低于中、重度組（P＜0.01）。PIH輕、中、重度組妊娠bcl-2的表達強度與ki67的表達強度經等級相關分析無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。3 討論3.1 正常妊娠與妊高征胎盤組織bcl－2、bax的基因表達bcl－2是細胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bcl－2定位在S－cell表達，并且從正常早孕到晚期妊娠持續(xù)出現[3，6]，因此保留滋養(yǎng)層細胞團可能是維持妊娠的一種機制[1]。晚期妊娠bcl－ 2表達下降、可能是因為bcl－2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細胞不再需要存活，可能是細胞凋亡的一種早期生物學變化，也可能與分娩有關[2]。 目前已知bcl－2和bax是bcl－2家族中重要成員。bcl－2表達水平較高時，可形成bcl－2和bax的異源二聚體，細胞凋亡受到抑制； bax表達水平較高時，可形成bax－bax同源二聚體，加速細胞凋亡。本研究中，對照組bcl－2與bax的陽性率為66．7％與80％，PIH組的陽性表達均為75％，表明大多數胎盤組織均呈bcl－2與bax高表達。bcl－2和bax表達已在一定水平上達到平衡，所以在胎盤組織中不起介導細胞凋亡的主導作用。 PIH組的bax并無隨病情的嚴重程度而有下降的趨勢，說明bax會進一步影響妊娠的結局，反映病情的嚴重程度。這些結果可能提示，胎盤的細胞凋亡并不是bax單獨起作用，但有待進一步證實。3．2 正常妊娠與妊高征胎盤組織中ki67的表達及bcl－2、bax的關系ki67同細胞增殖核抗原（PC－NA）、拓樸異構酶Ⅱ一樣，在細胞群和組織中可作為增殖細胞的選擇性標記。在細胞周期S、G2、M期均有表達，而G0期缺如。本研究中在C－cells中表達，妊娠早期表達最豐富，妊娠中期次之、晚期表達最少，提示早期胎盤活性是高增殖的[3]。在妊高征組中ki67表達多為強陽性，提示hi67的過度表達與C－cells活性有關。在PIH中，胎盤局部缺血是由于子宮胎盤血流下降引起[4]，因為S－cells對缺血缺氧敏感，導致S－cells受損，所以出現代償性的過早成熟的C－cells增生。這種病理變化可能是S－cells損傷或壞死的指征，增生的C－cells修復和補償受損的S－cells，這種結果可能是絨毛對血流障礙的代償性反應。Redline等[5]報道在先兆子癇胎盤中間層滋養(yǎng)細胞表達PCNA時顯示陽性，但bcl－2為陰性。本組孕32周重度PIH胎死宮內1例，其bcl－2表達為陰性，bax與ki67均為陽性，但病例少，需積累更多病例探討。 分析ki67與bcl-2及baX的關系，未發(fā)現它們之間有相關性，說明bcl－2和bax在胎盤發(fā)生過程中不引起細胞增殖，只是通過阻止細胞凋亡和延長細胞存活，增多細胞數量。ki67的表達增加說明C－cells增殖可能與其他基因的異常有關，如 p53、ras和myc等，是多種基因產生不同的途徑，在PIH中Ca2濃度的變化，TNF-α的變化等都可能直接或間接影響細胞凋亡。近年又報道，IL－10、Fas也參與細胞調亡[6，7]，因此，引起細胞凋亡并非一、兩種因子，而是多種因子共同作用的結果。
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